一种偶氮化合物的制备及检测方法.pdf

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(19) 国家知识产权局 (12) 发明专利申请 (10) 申请公开号 CN A (43) 申请公开日 2022.07.08 (21) 申请号 2.8 (22) 申请日 2021.01.05 (71) 申请人 广东东阳光药业有限公司 地址：广东省东莞市松山湖园区工业北路1号 (72) 发明人 王忠清 许国斌 朱文敏 廖守柱 刘子建 罗晖 杨小琴 (51) 国际专利G01N 30/06 (2006.01)G01N 30/14 (2006.01)G01N 30/12 (2006.01)G01N 30/02 (2006.01)G01N 30/72 (2006.01)G01N 30/34 (2006.01)G01N 30/86 (2006.01)G01N 30/88 (2006.01)权利要求书2页说明书12页附图6页(54)发明名称偶氮化合物的制备及检测方法(57)摘要本发明涉及一种偶氮化合物的制备及检测方法，属于药物化学领域。该制备方法包括原料的催化氢化反应和再氧化反应，制备得到目标化合物。本发明提供的制备及分析检测方法，可以很好的得到目标化合物并对其含量进行检测分析，从而控制药品的质量，提高用药的安全性。

A5 0 6 0 2 7 4 1 1N C CN A 1/2 Page 1.一种化合物E的制备方法，包括： 1)在氢气和催化剂存在下，化合物C在反应溶剂中发生还原反应，反应结束后，过滤化合物C，滤液蒸干得到化合物D； 2)在惰性气体保护下，将化合物D、碘化钠、次氯酸叔丁酯与乙腈混合，搅拌反应，反应结束后，经后处理得到化合物E；所述惰性气体选自氮气、氩气中的至少一种。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述催化剂选自钯碳、雷尼镍中的至少一种；其中所述催化剂与化合物C的质量比为1:150-1:250。 3.根据权利要求1所述的方法，其中反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的至少一种；化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.03g/mL-0.08g/mL。4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)中的反应温度为20℃-40℃，反应时间为12h-24h；步骤2)中的反应温度为20℃-50℃，反应时间为3h-8h。5.根据权利要求1所述的方法，其中碘化钠与化合物D的摩尔比为1:1-3:1；次氯酸叔丁酯与化合物D的摩尔比为1:1-3:1。 6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)中，所述后处理包括：将反应溶液过滤，将滤饼与醇溶剂在60°C-90°C下打浆0.1h-2h，过滤，干燥；其中所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种。

7. 根据权利要求 1 所述的方法，还包括： 在惰性气体保护下，化合物 A 与还原剂在反应溶剂中反应生成化合物 B，反应完毕，降温至室温，过滤，滤液与空气接触，搅拌反应，反应完毕，经后处理得到化合物 C ; 所述惰性气体选自氮气、氩气中的一种； 所述还原剂为锌粉和氯化铵； 氯化铵与化合物 A 的摩尔比为 1:1-2:1， 锌粉与化合物 A 的摩尔比为 2:1-4:1 ; 或者在催化剂和氢气存在下，化合物 A 在反应溶剂中反应生成化合物 B，反应完毕，降温至室温，过滤，滤液与空气接触，搅拌反应，反应完毕，经后处理得到化合物 C ; 所述催化剂选自钯碳、雷尼镍中的至少一种；其中反应溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一种，化合物A与反应溶剂的质量体积比为0.05g/mL-0.15g/mL，反应温度独立地为20℃-80℃。8.权利要求1所述的化合物E和化合物C的分析检测方法，包括：采用HPLC-MS检测样品溶液，采用填充高强度硅胶颗粒的色谱柱，流动相分为A相和B相，A相为酸性水溶液，B相为乙腈；所述酸性水溶液选自甲酸水溶液或乙酸水溶液中的至少一种，酸与水的体积比(V/V)为0.5∶1000～1.5∶1000。

9.根据权利要求8所述的方法，其中色谱柱的填料为高强度硅胶颗粒，A相与B相的体积比为70～75：30～25。10.根据权利要求8或9所述的方法，包括以下步骤：a)取待测样品适量，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，得到样品溶液； b)设定流动相流速为0.8mL/min-1.2mL/min，检测器为三重四极杆质谱检测器，离子源为AJS-ESI离子源，扫描模式为(+)，离子源离子极性为正离子模式，检测器选择离子为m/z＝509.4(+)和m/z＝525.3(+)，样品盘温度为5℃-30℃，进样量为1μL-5μL，运行时间不少于8min；c)取步骤a)的样品溶液，注入高效液相色谱-质谱仪中，完成化合物E和化合物C的分离测定。33 CN A 说明书 第1/12页 偶氮化合物的制备及检测方法 技术领域 [0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种偶氮化合物的制备及检测方法。背景技术 [0002]米拉贝隆（），化学名 (R)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-4-[2-[(2-羟基-2-苯乙基)氨基]乙基]乙酰苯胺，分子式 C H NO S，结构如下： 21 24 4 2 [0003] [0004]米拉贝隆是第一个用于治疗膀胱过度活动症的β3-肾上腺素受体激动剂药物。使用该药物可以在膀胱充盈-排尿周期的储存期松弛逼尿肌平滑肌，从而促进膀胱容量增加。主要用于治疗急迫性尿失禁、尿急、尿频等症状的膀胱过度活动症（OAB）。

[0005] 米拉贝隆生产过程中可能产生各种杂质，危害较大的杂质，特别是遗传毒性杂质，可能对人体造成危害，对药品造成安全隐患，因此需要对可能产生的杂质进行充分研究。发明内容[0006] 如下式所示的偶氮化合物E和偶氮化合物C是米拉贝隆生产过程中可能产生的杂质，为了充分研究杂质的检测方法、杂质的影响等，需要制备杂质对照品。 [0007] 第一方面，本发明提供了一种米拉贝隆偶氮杂质化合物E的制备方法。 [0008] 一种化合物E的制备方法，包括： [0009] [0010] [0011] 1)在氢气和催化剂的存在下，化合物C在反应溶剂中进行还原反应，反应结束后，过滤，滤液蒸发，得到化合物D； [0012] 2)在惰性气体保护下，将化合物D、碘化钠、次氯酸叔丁酯与乙腈混合，搅拌反应，反应结束后，经后处理得到化合物E。 [0013] 在步骤1)中，催化剂选自钯碳和雷尼镍中的一种。在一些实施例中，所述催化剂为钯碳。在一些实施例中，所述催化剂为雷尼镍。 [0014] 在步骤1)中，催化剂与化合物C的质量比可以为1:150-1:250。在某些实施例中，催化剂与化合物C的质量比为1:200。

[0015] 在步骤1)中，所述反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的至少一种。在一些实施例中，所述反应溶剂为甲醇。在一些实施例中，所述反应溶剂为乙醇。在一些实施例中，所述反应溶剂为乙酸乙酯。[0016] 在步骤1)中，化合物C与反应溶剂的质量体积比可以为0.03g/mL-0.08g/mL。在一些实施例中，化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.03g/mL-0.05g/mL。在一些实施例中，化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.05g/mL-0.08g/mL。在一些实施例中，化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.03g/mL。在一些实施例中，化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.05g/mL。在一些实施例中，化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.08g/mL。 [0017]步骤1)中，所述反应的反应温度可以为20°C-40°C。在一些实施例中，所述反应温度为30°C。[0018]步骤1)中，所述反应时间可以为12h-24h。在一些实施例中，所述反应时间为16h。在一些实施例中，所述反应时间为18h。在一些实施例中，所述反应时间为20h。[0019]步骤2)中，所述惰性气体选自氮气、氩气中的一种。

在一些实施例中，所述惰性气体为氮气。[0020]步骤2)中，反应温度可以为20℃-50℃。在一些实施例中，步骤2)中，反应温度为25℃、30℃或35℃。[0021]步骤2)中，反应时间可以为3h-8h。在一些实施例中，步骤2)中，反应时间为5h。[0022]步骤2)中，碘化钠与化合物D的摩尔比为1:1-3:1。在一些实施例中，碘化钠与化合物D的摩尔比为2:1。[0023]步骤2)中，次氯酸叔丁酯与化合物D的摩尔比可以为1:1-3:1。在一些实施例中，次氯酸叔丁酯与化合物D的摩尔比为2:1。 [0024] 在步骤2)中，所述后处理包括：将反应液过滤，将滤饼在60°C-90°C醇溶剂中打浆0.1h-2h，过滤，干燥，即得化合物E。在一些实施例中，所述后处理包括：将反应液过滤，将滤饼在60°C-80°C醇溶剂中打浆0.5h，过滤，干燥，即得化合物E。在一些实施例中，所述后处理包括：将反应液过滤，将滤饼在65°C或78°C醇溶剂中打浆0.5h，过滤，干燥，即得化合物E。[0025] 所述醇溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种。

在一些实施例中，所述醇类溶剂为甲醇。 在一些实施例中，一种化合物E的制备方法，包括： 1)在氢气和催化剂的存在下，化合物C在反应溶剂中发生还原反应，反应完毕，过滤，滤液旋干后得到化合物D ；其中，所述催化剂选自钯碳、雷尼镍中的一种；催化剂与化合物C的质量比为1:150-1:250；反应溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一种；化合物C与反应溶剂的质量体积比为0.03g/mL-0.08g/mL；反应时间为12h-24h内；反应的反应温度为20℃-40℃； 2)惰性气体保护下，将化合物D、碘化钠、次氯酸叔丁酯与乙腈混合，搅拌反应，终止反应，经后处理得到化合物E；其中，惰性气体为氮气、氩气中的一种；反应温度为20℃-50℃；反应时间为3h-8h；后处理包括：将反应液过滤，将滤饼用醇溶剂在60℃-90℃下打浆0.1h-2h，过滤，干燥，醇溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种。 55 CN A 说明书 第 3/12 页 [0027] 本发明提供的方法可以方便的得到化合物E，且得到的化合物E（即1,2-双（4-（2-（（（R）-2-羟基-2-苯乙基）氨基）乙基）苯基）偶氮）的纯度大于95.0％或97.0％或98.0％或99.0％。

[0028] 上述方法中，化合物C可采用任意合适的方法制备。 [0029] 在一些实施方案中，制备化合物C的方法包括：在惰性气体保护下，化合物A与还原剂在反应溶剂中反应生成化合物B，反应结束后，降温至室温，过滤，然后将滤液与空气接触，搅拌反应，反应结束后，经后处理得到化合物C；所述惰性气体选自氮气或氩气中的一种。 在一些实施方案中，制备化合物C的方法包括：在催化试剂和氢气存在下，化合物A在反应溶剂中反应生成化合物B，反应结束后，降温至室温，过滤，然后将滤液与空气接触，搅拌反应，反应结束后，经后处理得到化合物C。反应式如下： [0030] [0031] 所述制备化合物C的方法中，所述惰性气体选自氮气、氩气中的至少一种，在本发明的一些实施例中，所述气体为氮气。 [0032] 所述制备化合物C的方法中，所述还原剂为锌粉和氯化铵，所述氯化铵与化合物A的摩尔比可以为1:1-2:1，在本发明的一些实施例中，所述氯化铵与化合物A的摩尔比为1:1-1.5:1，在本发明的一些实施例中，所述氯化铵与化合物A的摩尔比为1.5:1-2:1，在本发明的一些实施例中，所述氯化铵与化合物A的摩尔比为1:1。

在一些实施例中，氯化铵与化合物A的摩尔比为1.5:1。在一些实施例中，氯化铵与化合物A的摩尔比为2:1。[0034]锌粉与化合物A的摩尔比可以为2:1-4:1。在一些实施例中，锌粉与化合物A的摩尔比为2:1-3:1。在一些实施例中，锌粉与化合物A的摩尔比为3:1-4:1。在一些实施例中，锌粉与化合物A的摩尔比为2.5:1。在一些实施例中，锌粉与化合物A的摩尔比为3:1。在一些实施例中，锌粉与化合物A的摩尔比为3.5:1。[0035]在制备化合物C的方法中，催化剂选自钯碳和雷尼镍中的至少一种。在一些实施例中，催化剂为钯碳。在一些实施例中，催化剂为雷尼镍。 [0036] 制备化合物C的方法中，反应溶剂选自水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的至少一种。在一些实施例中，反应溶剂为水。在一些实施例中，反应溶剂为甲醇。在一些实施例中，反应溶剂为乙醇。在一些实施例中，反应溶剂为乙酸乙酯。[0037] 制备化合物C的方法中，化合物A与反应溶剂的质量体积比可以为0.05g/mL-0.15g/mL。

在一些实施例中，化合物A与反应溶剂的质量体积比为0.05g/mL-0.10g/mL。 在一些实施例中，化合物A与反应溶剂的质量体积比为0.10g/mL-0.15g/mL。 在一些实施例中，化合物A与反应溶剂的质量体积比为0.08g/mL。 在一些实施例中，化合物A与反应溶剂的质量体积比为0.10g/mL。 在一些实施例中，化合物A与反应溶剂的质量体积比为0.12g/mL。 [0038] 在制备化合物C的方法中，反应的反应温度可以分别独立地为20℃-80℃。 在一些实施例中，反应温度为20℃-50℃。 在一些实施例中，反应温度为20℃-65℃。 在一些实施例中，反应温度为50℃-80℃。在一些实施例中，所述反应温度为50°C-65°C。 在一些实施例中，所述反应温度为65°C-80°C。 在一些实施例中，所述反应温度为25°C。 在一些实施例中，所述反应温度为50°C。 在一些实施例中，所述反应温度为65°C。 在一些实施例中，所述反应温度为75°C。 [0039] 所述化合物C的制备方法中，所述搅拌反应时间为5h-15h。

在一些实施例中，搅拌反应时间为5h-10h。 在一些实施例中，搅拌反应时间为10h-15h。 在一些实施例中，搅拌反应时间为8h。 在一些实施例中，搅拌反应时间为11h。 在一些实施例中，搅拌反应时间为13h。[0040] 在制备化合物C的方法中，后处理包括：将反应溶液冷却至室温，过滤，将滤饼用醇溶剂调浆，过滤，将所得固体干燥，得到化合物C；醇溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的至少一种。 在一些实施例中，有机溶剂为甲醇。 在一些实施例中，有机溶剂为乙醇。 在一些实施例中，有机溶剂为异丙醇。[0041] 在本发明中，可以采用液相色谱(HPLC)监测反应终点；当检测显示反应底物的峰面积≤1.0％时，可以认为反应结束。 [0042] 本发明第二方面提供了一种化合物E和化合物C的分析检测方法。 [0043] 一种化合物E和化合物C的分析检测方法，包括：采用HPLC-MS检测样品溶液，采用色谱柱，色谱柱中填充有高强度硅胶颗粒，流动相分为A相和B相，A相为酸性水溶液，B相为乙腈。 [0044] 所述色谱柱的填料为高强度硅胶颗粒(HSS)。

在一些实施例中，所述色谱柱可以为。[0045] 所述酸水溶液选自甲酸水溶液和乙酸溶液中的至少一种。在一些实施例中，所述酸水溶液为甲酸水溶液。[0046] 所述酸与水的体积比(V/V)为0.5:1000至1.5:1000。在一些实施例中，所述酸与水的体积比(V/V)为1:1000。[0047] 所述洗脱步骤中A相与B相的体积比为70-75:30-25。在一些实施例中，所述洗脱步骤中A相与B相的体积比为73:27。 [0048] 在一些实施例中，化合物E和化合物C的分析检测方法可以包括以下步骤或者按照以下步骤实施： [0049] a) 取适量待测样品，加甲醇超声溶解，稀释至刻度，振摇，得到样品溶液； [0050] b) 设置仪器参数：检测器、离子源、扫描模式、流动相流速、进样量、样品盘温度、运行时间； [0051] c) 取步骤a)的样品溶液，注入高效液相色谱-质谱仪中，完成化合物E和化合物C的分析检测。 [0052] 步骤a)中，每1mL反应溶液中可以含有0.2mg-1mg待测样品。 在一些实施例中，步骤a)中，每1mL反应溶液中含有0.3mg、0.5mg或0.8mg待测样品。

[0053] 在步骤b)中，检测器为三重四极杆，离子源为AJS-ESI离子源，扫描方式为(+)。[0054] 在步骤b)中，离子源采用的离子极性为正离子模式，检测器选取离子m/z=509.477CN A规格第5/12页(+)和m/z=525.3(+)。[0055] 在步骤b)中，流动相的流速可以为0.8mL/min-1.2mL/min。在一些实施例中，在步骤b)中，流动相的流速为0.9mL/min。在一些实施例中，在步骤b)中，流动相的流速为1.0mL/min。在一些实施例中，在步骤b)中，流动相的流速为1.1mL/min。[0056] 在步骤b)中，样品溶液进样量为1μL-5μL。在一些实施例中，样品溶液注入量为2μL。在一些实施例中，样品溶液注入量为3μL。在一些实施例中，样品溶液注入量为4μL。[0057]步骤b)中，样品盘温度为5℃-30℃。在一些实施例中，样品盘温度为5℃-25℃。在一些实施例中，样品盘温度为10℃。在一些实施例中，样品盘温度为15℃。在一些实施例中，样品盘温度为20℃。

在一些实施例中，样品盘温度为25℃。[0058]步骤b)中，运行时间不少于8分钟。在一些实施例中，运行时间为8分钟。[0059]在一些实施例中，化合物E和化合物C的分离检测方法包括以下步骤或可按照以下步骤实施：[0060]d)取适量待测样品，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，得到样品溶液； [0061] b)设定流动相流速为0.8mL/min-1.2mL/min，检测器为三重四极杆质谱检测器，离子源为AJS-ESI离子源，扫描模式为(+)，离子源离子极性为正离子模式，检测器选取离子为m/z=509.4(+)和m/z=525.3(+)，样品盘温度为5°C-30°C，进样量为1μL-5μL，运行时间不小于8min； [0062] c)取步骤a)的样品溶液，注入高效液相色谱-质谱仪中，完成化合物E和化合物C的分离测定。 [0063] 所述高效液相色谱-质谱仪(HPLC-MS)可以是US 1260高效液相色谱质谱系统及工作站，也可以是其他合适可行的系统。 [0064] 在一些实施方案中，所述分离检测化合物E和化合物C的方法包括：采用HPLC-MS检测化合物E和化合物C的样品溶液，其中，所述检测所用的色谱柱选自

[0065] 在一些实施方案中，所述分离检测化合物E和化合物C的方法包括：采用HPLC-MS法检测化合物E和化合物C的样品溶液，其中，检测所用的色谱柱选自：流动相分为A相和B相，A相为0.1％甲酸水溶液，B相为乙腈。[0066] 在一些实施方案中，所述分离检测化合物E和化合物C的方法包括：采用HPLC-MS法检测化合物E和化合物C的样品溶液，其中，检测所用的色谱柱选自：流动相分为A相和B相，A相为0.1％甲酸水溶液，B相为乙腈；A相中甲酸水溶液中甲酸与水的体积比(V/V)为0.5:1000至1.5:1000；A相与B相的体积比为73:27。 [0067] 采用本发明的分离方法，分离检测化合物E和化合物C的时间可以在10分钟内完成。 [0068] 术语解释： [0069] 在本说明书的描述中，使用术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等描述，表示结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或特性包含在本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，上述术语的示意性表述不一定指代相同的实施例或示例。

此外，所描述的具体特征、结构、材料或特性可以在任何一个或多个实施例或示例中以合适的方式组合。此外，本领域技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例中的特征进行组合和组合，而不会产生矛盾。[0070] 在本发明中，“化合物A”和“式A所示的化合物”等表述代表同一种化合物。[0071] 术语“室温”是指约20°C-35°C或约23°C-28°C或约25°C的温度。[0072] 在上述或下文中，无论是否使用“约”或“大约”字样，本文公开的所有数字均为近似值。每个数字的值可以相差1％、2％、5％、7％、8％或10％。[0073] 本发明的方法可以使用液相色谱法（HPLC）检测反应物的纯度。本发明提供的方法，通过控制合适的反应条件，得到纯度大于95.0%、97.0%、98.0%或99.0%的化合物E(即1,2-双(4-(2-(((R)-2-羟基-2-苯乙基)氨基)乙基)苯基)偶氮)。附图简要说明[0075]图1为实施例1中化合物E的质谱图；[0076]图2为实施例2中空白溶液的HPLC-MS谱图，横坐标表示采集时间(Time)，单位为分钟(min)，纵坐标表示响应强度()；[0077]图3为实施例2中参比溶液的HPLC-MS谱图，横坐标表示采集时间(Time)，单位为分钟(min)，纵坐标表示响应强度()； [0078] 图4为实施例2中检测限溶液的HPLC-MS谱图，横坐标表示采集时间（Time），单位为分钟（min），纵坐标表示响应强度()；[0079] 图5为实施例2中测试溶液的HPLC-MS谱图，横坐标表示采集时间（Time），单位为分钟（min），纵坐标表示响应强度()；[0080] 图6为实施例2中加标测试溶液的HPLC-MS谱图，横坐标表示采集时间（Time），单位为分钟（min），纵坐标表示响应强度()。

具体实施方式[0081]为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步公开一些非限制性的实施例，对本发明作进一步详细的说明。[0082]本发明所用到的试剂均可从市场上购得，也可以按照本发明所述方法制备。[0083]本发明实施例中，准确度涉及供试品加标溶液中加标杂质的峰面积与对照品溶液中对应杂质的平均峰面积的比值(R)，计算公式如下：[0084] [0085]其中：A为供试品加标溶液中对应杂质的峰面积；T+S[0086]A为供试品溶液中对应杂质的峰面积； T [0087] A为对照溶液中对应杂质3个点的峰面积平均值；S [0088] W为供试品溶液中供试品的取样量，mg；T [0089] W为供试品加标溶液中供试品的取样量，mg。T+S99 CN A 说明书第7/12页 [0090] 本发明中，HPLC-MS表示高效液相色谱-质谱法；MS表示质谱检测器；mL表示毫升，h表示小时，g表示克，mg表示毫克，mg/mL表示毫克每毫升，℃表示摄氏度，HPLC表示液相色谱法。[0091] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细描述。

化合物C的制备： 方法一：室温下将化合物A(12.47g，1.0eq)和甲醇(125mL，10V)加入到250mL两口瓶中，搅拌，再加入NHCl(3.1g，1.5eq)和水(60mL，5V)配制的溶液和锌粉(7.58g，3.0eq)，4氮气真空置换三次后，升温至65℃，反应5小时，HPLC监测化合物A小于5.0％。反应完毕，冷却至室温，过滤，将滤液转移至250mL单口瓶中，升温至50℃，搅拌10小时，取样，HPLC监测化合物B小于1.0％。反应完毕，冷却至室温，过滤，滤饼用甲醇（50mL）打浆1小时，过滤，湿品放置60℃真空干燥（-0.09MPa）16小时，得化合物C：6.27g，纯度96.65%，收率54.3%；检测：ESI-MS（m/z）：1 525.3（M+H+）； HNMR (, DMSO-d) δ9.18 (brs, 4H), 8.22 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 8.10 (d, J＝6 8.0Hz,2H),7.53(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(m,8H),7.33(m,2H),6.28(d,2H),5.15(d ,2H),2.96-3.26(米,12H)。

方法2：将化合物A(10.0g，1.0eq)、5%钯碳(0.3g)和水(100mL，10V)在室温下加入到250mL高压氢化反应器中，真空置换三次后氮气置换为氢气。氢气加压至2.5MPa，升温至50℃反应1.5h，HPLC监测化合物A小于5.0%。冷却至室温，过滤，将滤液转移至250mL单口瓶中；加热至50℃搅拌10h，HPLC监测化合物B小于1.0%，转化完全。将混合物冷却至室温，过滤，并用甲醇（50 ml）滤滤器1小时，然后将湿产物放置在60°C下，并在16小时内干燥，并在16小时内干燥，以获得化合物C：4.76 g，纯度95.92％， 95.92％和示例51.4％（30 g）（30 g）（3 g）（3 g）（3 g）（3 g）。将其添加到100 mL的两领瓶中，并在30°C中用氢气升高到30°C中。反应完成后，将混合物用吸力过滤，并将滤液蒸发至固体，以获得2.7 g的化合物D，纯度为96.32％，产率为92.2％。将（30 mL）添加到50 mL的两个胸腔中，并用氮真空替换了三次（0.43 g，2.0 eq）。反应完成后，将混合物用乙腈（3 mL）冲洗并干燥，将湿产物（1.05 g）添加到甲醇（10 mL）中，热蛋白（内部温度为65°C）（65°C），以0.5 h，过滤和湿的产品（0.85）添加到湿糖（0.85）中，以进行7 ml（8 mL），速度（8 mL），速度为HOTED;在60°C下，在真空中干燥（-0.09 MPa），持续14小时，以获得1 e：0.53 g，纯度97.78％，产量为53.2％：ESI-MS（M/Z）：509.3（M+H+）； HNMR (, DMSO-d) δ9.15 (brs, 4H), 7.87 (brd, J＝8.0 Hz, 4H), 7.50 (brd, J＝8.0 Hz, 4H), 7.42 (m, 8H), 6 7.33 (m, 2H), 6.23 (d, 2H), 5.02 (d, 2H), 3.03–3.268 (m, 12H).

[0101]示例2 [0102]仪器和条件[0103] [0104]实验程序[0105]流动阶段A：0.1％酸水溶液，将其添加到超纯水中，并将其添加到超纯水中溶液1：准确地重37.5毫克化合物C和化合物E分为100 mL容量烧瓶，将适当的甲醇添加到超声溶解中，然后稀释到尺度线上以获得[0109]参考物质储备溶液2：准确地将1 ml的参考物质储备溶液转移到50 ml沃尔剂中，以释放50 mL燃料，以稀释剂，稀释剂，稀释剂，稀释液； [0110]参考物质储备解决方案3：准确地将1 ml的参考物质储备溶液2转移到10 ml体积瓶中，用甲醇稀释到体积，然后摇动良好； 10毫升体积烧瓶，用甲醇稀释至体积，并摇动[0113]测试样品解决方案：准确地重25 mg测试样品，转移到50 ml体积瓶中，溶于甲醇并稀释到体积，然后摇动； [0114]测试样品尖峰溶液：准确地重25 mg测试样品到50 mL容量瓶中，加入1.0 ml参考物质储备溶液3，溶解在甲醇中并稀释至体积以获得100％测试样品尖刺溶液，并平行制备3部分。

采取空白解决方案，检测限制解决方案，测试解决方案，根据以下1111 CN的测试样品峰值解决方案9/12页面序列表（表A）以及LC-MS分析的上述条件，记录色谱图，如图1图6所示，结果是在表1中的测试加标溶液1针检测极限溶液3针参考解决方案1.56H 1针参考溶液2.56H 1针参考溶液3.84H 1针测试溶液1.15H 1针测试溶液2.15H 1针测试解决方案3.15H 1针测试解决方案（批次测试1）1针测试解决方案（批次测试2）1针测试溶液（二次测试溶液） （批次4）1针测试解决方案（批次5）1针测试解决方案（批次6）1针测试解决方案（批次7）1针测试解决方案（批次8）1针测试解决方案（批次9）1针测试解决方案（批次10）1针参考解决方案1针[0118]结果分析：表1系统适用性结果[0120] 1212 CN A 10/12 page [0122] 0122 [0122] [0122] 4]表3可检测性结果[0125] 1313 CN A规范11/12 Page [0126] [0127]表4检测限制结果[0128] [0129]表5解决方案稳定性结果[0130] [0131] [0131] 1414 CN A规范12/12 Page [012 Page [0132] [0132] [0132] Table 6 test [0133] Batch No. E C Test (Batch 1) Not Not Test (Batch 2) Not Not Test (Batch 3) Not Not Test (Batch 4) Not Not Test (Batch 5) Not Not Test (Batch 6) Not Not Test (Batch 7) Not Not Test (Batch 8) Not Not Test (Batch 9) Not Not Test (Batch 10) Not Not Limit of (LOD) 8.8 ppm8.8 ppm [0134] The of the has been , and can or and the and the , and scope of the to and apply the of the .

那些熟练的艺术可以参考本文的内容，并适当地提高过程参数。 9 CN A规格图5/6 Page 2020 CN A规范图6/6 Page 2121