庆大霉素c1 第11章 抗生素类药物的分析.ppt

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第十一章 抗生素药品（药品）分析 第一节概述 2. 抗生素药品质量分析：鉴别、检查、含量（效价） 方法：理化法、生物法（1）??鉴别试验 1． ？官能团的显色反应 2. ?光谱：UV、IR3。 ？色谱分析：TLC、HPLC4．生物学方法：检查灭活前后抗生素的抗菌能力，并与对照品比较进行鉴别。 （二）检验检验项目包括： 1）影响产品稳定性的指标； 2）控制有机或无机杂质的指标： 3）与临床安全密切相关的指标； 4）其他指标 （3）含量测定或效价测定 1、微生物测定法原理：根据抗生素对微生物的杀灭或抑制程度来测定抗生素的效价。特点：1）灵敏度高； 2）测量原理符合临床应用要求，更能体现其医学价值； 3）应用范围广（纯品、粗品、混合品等）； 4）操作繁琐，误差大，有逐渐被物理、化学方法取代的趋势。 2、理化方法：各国药典主要采用HPLC法测定纯化品和药物结构明确的抗生素。 3、抗菌活性表示方法：以效价单位表示，即“单位（u）”或“微克（μg）”。效价单位的基准对于不同的抗生素有不同的规定。

例：青霉素钠1mg=1670u，庆大霉素1mg=590u 三、抗生素的分类 在工业生产和质量控制分析中，常用化学结构进行分类，可分为： 1）β-内酰胺环（青霉素、头孢菌素）细菌素）； 2）氨基糖苷类（链霉素、庆大霉素、卡那霉素等）； 3)四环素类(四环素、金霉素、土霉素等)； 4)大环内酯类(红霉素、麦地霉素、螺旋霉素等)； 5)多烯大环化合物(制霉菌素、两性霉素B等)； 6)多肽类(多粘菌素、放线菌素等)； 7）苯胺类（氯霉素等）； 8)蒽环类药物(阿霉素、红霉素等)。 9) 其他抗生素第 2 部分？ - 内酰胺类抗生素主要包括：青霉素家族（PC）和头孢菌素家族（CEP） 一、化学结构与性质 1.化学结构 化学结构特点 1）分子结构 母核由母核和侧链（RCO）组成-)：由A环(β-内酰胺环)和B环(氢化噻唑环或氢化噻嗪环)构成。青霉素家族（PC）的母核：6-氨基青霉烷酸（即6-APA） 头孢菌素（CEP）家族的母核：7-氨基头孢烷酸（即7-ACA） 2）含有游离羧基且酰胺侧链。 3）具有手性碳原子：PC有3个（C3、C5、C6）； CEP 有两个（C6、C7）。

2、性质（1）酸性和溶解性；游离羧基呈强酸性，易形成盐。碱金属盐易溶于水，而青霉素有机碱盐难溶于水，易溶于有机溶剂。 (2)旋光性；青霉素和头孢菌素分子均含有手性碳原子，且均具有旋光性，可据此进行定性和定量分析。 (3)紫外吸收光谱：青霉素分子母核中不存在离域共轭体系。如果侧链R中存在紫外活性共轭体系，则青霉素将呈现出特征光谱。例：青霉素钾（钠），R为苄基，其水溶液在264nm处有强吸收。头孢菌素分子核心存在一个O=CNC=C紫外光谱活性基团，因此该类抗生素均表现出光谱活性。示例：头孢氨苄水溶液在 262nm 处有紫外吸收。 (4)内酰胺环的不稳定性？内酰胺环是该类药物结构中最不稳定的部分，其稳定性与含水量和纯度有关。在水溶液中： ?——内酰胺环易被亲核或亲电子试剂（例如：酸、碱、青霉素酶、金属离子等）攻击，导致环分解或发生分子重排，从而失去抗菌活性。在干燥和纯固体中：它们表现出很强的稳定性，这是保存此类制剂的有利因素。两类比较：同等条件下，头孢菌素会比青霉素类表现出更强的稳定性。然而，酸、碱、β-内酰胺酶和胺都可以加速头孢菌素家族分子的降解。

二、鉴别试验 （一）显色反应 1、异羟肟酸铁的反应原理是青霉素或头孢菌素在碱性介质中时，分子中的酰胺基与盐酸羟胺反应生成异羟肟酸。然后该产物与酸性硫酸铁胺硫酸盐的 Fe3+ 络合，生成红色络合物。颜色。例：头孢哌酮呈红棕色，其反应式为2。 类似肽键的反应（茚三酮反应）：一些在侧链取代基的R-CONH-结构中带有氨基酸结构的药物（如氨苄青霉素和头孢氨苄，其中R-是苯甲基）可以发生茚三酮反应。 。 3．其他显色反应： 硫酸-硝酸反应：头孢菌素类可与硫酸-硝酸反应产生颜色。例如：头孢噻吩钠呈红棕色，头孢氨苄呈黄色。硫酸-甲醛显色反应：观察药液在冷、热硫酸-甲醛中的颜色变化（见下表）。 （二）各种盐的反应 1.钾盐和钠盐的火焰反应 2.重氮化偶联反应：青霉素及其盐中，若能生成芳香胺或芳香胺，可采用重氮化偶联反应生成偶氮染料的红色沉淀。例：青霉素有机盐：普鲁卡因青霉素和苄星青霉素水溶液酸化后，分别发生芳香胺和芳香胺的重氮化偶联反应。普鲁卡因青霉素：H2N-C6H5--N(C2H5)2?PG-COOH·H2O (3)光谱测定 1.红外(IR)吸收光谱。 2.紫外（UV）分光光度法①、采用最大吸收波长或最大吸收波长-吸光度鉴别法； ②、水解物最大吸收波长鉴别法。

(4)色谱法的适用性：各国药典中广泛采用色谱法来鉴别该类药物。 1、薄层色谱（TLC）：对照品比较法，鉴别主斑点的比移值（Rf）是否一致； 2、高效液相色谱法（HPLC）：在含量测定项下，按照标准物质比较法，在HPLC中，用主峰保留时间（tR）来控制是否一致，进行鉴别。 3、特殊杂质的检验 (1)聚合物示例：头孢他啶中头孢他啶聚合物的测定 色谱条件 色谱柱：采用 G-10为填料，玻璃柱内径1.3-1.6cm，柱高30-40cm；流动相：A——含3.5%硫酸铵的0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0），B——水；流量：0.8ml/min；检测波长：254nm；系统适用性试验：分别使用流动相A、B，以蓝色右旋糖酐2000峰为标准，理论板数不低于900，拖尾因子均小于2.0，两种流动相的保留时间比相为0.93-1.07； B是流动相。重复进样，峰面积的相对标准偏差应小于5.0%。方法：外标法（2）有关物质及异构体示例：头孢呋辛酯中有关物质及异构体的检查。异构体的制备：在加热和光照下制备含有Δ3和E异构体的头孢呋辛酯。构象。色谱条件：分析柱：ODS；流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇(62:38)；流量：1ml/min；检测波长：278nm。

该系统适用于系统测试：要求头孢呋辛酯A与B异构体、A异构体与Δ3-异构体之间的分离度大于1.5；理论塔板数按头孢呋辛酯A异构体峰计算，应不低于1500。 方法：异构体A与A+B的峰面积比应为0.48-0.55。有关物质-高低浓度比较法。高浓度供试品中杂质峰面积之和不得大于低浓度供试品中主峰面积之和。区域。 (3)吸光度 Ch.P中常用测定杂质吸光度的方法来控制该类抗生素的杂质含量。例：用1.80mg/ml供试品水溶液检查青霉素钠（钾）吸光度 1）280nm（杂质）：吸光度应不大于0.10 2）264nm（青霉素钠（钾））：有为最大吸收，吸收度应为0.80-0.88。 4.含量测定大多采用物理、化学方法，极少数采用微生物测定法 Ch.P：HPLC、UV、碘量法、电位滴定法 (1)碘量法 1、原理：青霉素族或头孢菌素族 分子本身不与碘发生反应，不消耗碘。但它们的降解产物会与碘发生氧化还原反应，根据消耗的碘量可以定量分析相应的β-内酰胺类抗生素。反应分两步进行。 2.讨论 (1)CEP系列药物与PC系列药物相同，也是分两步加工。 (2)第一步反应中的水解反应是按化学计量完成的。 (3)第二步反应的摩尔比易受温度、pH值、反应时间等因素影响：一般情况下，温度24-26℃，pH 4.5，加入碘溶液，放置在黑暗中15-20分钟。

(4)通常需要与标准标准进行平行控制实验，以消除因条件控制差异而引起的实验误差。 (5)用未水解的供试品溶液进行空白实验：纠正PC降解产物及其他消耗碘的杂质对测定结果的影响。 (6)接近终点时加入淀粉指示剂，在剧烈摇动下缓慢滴定至蓝色消失：如果摇匀后又出现消失的蓝色，则说明尚未达到终点。 3．测定方法示例：注射用普鲁卡因青霉素 1）方法：精密量取供试品——将水溶液放入碘瓶中——加NaOH溶液，放置20分钟——加1mol/L盐酸溶液和乙酸1ml - 乙酸钠缓冲液 5 ml 溶液（pH 4.5） - 精确加入 15 ml 碘滴定液 - 盖紧，摇匀，置于 20-25°C 暗处 20 分钟 - 用滴定剂滴定 - 添加淀粉指示剂接近终点时，继续滴定，直至蓝色消失。 2）空白试验：用供试品溶液水解，不加NaOH溶液，进行平行实验，以消除供试品中可被碘氧化的杂质的干扰。 3）对照实验：与青霉素标准品进行平行实验，以消除因条件控制差异造成的碘氧化反应摩尔比的差异。 （2）电位配位滴定法基本原理：青霉素分子不与汞盐发生反应，但其碱性水解产物青霉素唑酸在一定条件下可与铜离子、汞离子等二价过渡金属离子形成稳定的配位。电位化合物，其可能的结构为： 电位配位滴定：供试品——碱水解——硝酸汞滴定——电位指示终点（指示电极：铂；参比电极：汞——硫酸汞）。

讨论： 1. 水解必须完全：溶液 pH (4.6) 和反应时间（放置 15 分钟）是关键参数。 2、用空白实验，消除测试样品中可能存在的降解产物的干扰，消耗滴定剂：将测试样品作为空白实验，除不被氢氧化钠水解外，其他操作完全相同相同。 3．方法优点：与碘法相比，汞法不需要青霉素标准品作为对照，汞盐滴定剂可用EDTA校准。 4、适用范围：普鲁卡因青霉素、苯唑西林钠、青霉素钠、青霉素钾、青霉素V钾等含量的测定。 （3）可见紫外分光光度法基本原理：青霉素酸是青霉素类的降解产物，具有紫外吸收性能，在320nm-360nm有较强的吸收。然而，该水解产物不稳定。可以添加Cu2+或Hg2+。生成稳定的配位化合物，然后通过紫外分光光度法进行测量。 1、汞硫醇盐法原理：青霉素类抗生素在咪唑的催化下，与二氯化汞发生定量反应，生成相应的青霉酸汞硫醇盐，在324nm~345nm波长范围内有最大吸收。方法：对照品特征比较法 1）青霉素侧链取代基上如有氨基，必须进行乙酰化保护。 2）方法特异性强。 3）生成的光度产品比较稳定，可以稳定3小时以上。 4) 重现性好：相对标准偏差在1%以内。 2、酸水解-铜盐法 青霉素类抗生素在弱酸性下水解，与Cu2+反应，形成较稳定的螯合物，在320nm处有最大吸收。

3．异羟肟酸比色法青霉素、头孢菌素类抗生素可与羟胺反应生成异羟肟酸衍生物，在稀酸中与铁离子反应生成红色配位化合物，通过测定一定波长下的吸光度即可定量。 (4)HPLC法测定该类药物：在各国药典中，采用HPLC法测定的药物种类和数量不断增加。 《中国药典》中记载的此类抗生素原料及制剂约70种，其中约78%采用HPLC法测定。通常采用RP-HPLC外标法测定含量。头孢克洛的HPLC测定方法示例1)系统适用性试验：头孢克洛与头孢克洛δ-3-异构体的分离度应大于1.5。按头孢克洛峰计算的理论塔板数应不低于1500。 2）色谱条件：色谱柱-十八烷基硅烷键合硅胶；流动相-溶液(pH3.4)-乙腈(92:8)；流速——1毫升/分钟；检测波长 - 254nm。 3) 方法：按外标法以峰面积计算其含量。 (5)生物样品中β-内酰胺类抗生素的分析方法：色谱法、微生物法、放射免疫分析法等。其中，应用广泛的是HPLC法，其特点是特异性强、耐药性强、灵敏度高、检测方法多样。改变。第三节氨基糖苷类抗生素 ( ) 此类抗生素的结构特点：化学结构均为碱性环己烷多元醇以糖苷配基与氨基缩合而成的苷类。

这类常见的抗生素有：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素和巴龙霉素、硫酸奈替米星、硫酸西索米星、硫酸依替米星等，它们的抗菌谱和化学性质都很常见。一、化学结构和性质 以链霉素、巴龙霉素、庆大霉素、奈替米星为例，说明其结构和性质 1、化学结构 链霉素的结构是由一分子链霉素和一分子链二糖胺（两个强碱性链霉素）组成的碱性糖苷。胍基团和一个弱碱性甲氨基）。庆大霉素是由氰胺、脱氧链霉胺和加洛胺缩合而成的糖苷，表现为碱性糖苷（5个强度相似的弱碱性氨基）。庆大霉素药物：为庆大霉素C的复合物，主要成分为C1、C2、C1a、C2a。它们的结构反映在取代基R1、R2和R3上的差异。 2.性状 (1)溶解度和碱性：抗生素呈碱性，水溶性，常以硫酸盐形式存在。 (2)光学活性：该类抗生素分子结构中含有多个氨基糖，具有光学活性。 (3)苷类的水解和稳定性：一般在过酸或过碱的条件下都容易发生水解而失效。 (4)紫外吸收光谱：链霉素在230nm处有紫外吸收。其他的没有紫外线吸收。 2、鉴别试验 (1)茚三酮反应原理：氨基糖苷结构中的羟胺具有α-氨基酸的性质，能与茚三酮显色。 Ch.P：硫酸核霉素、硫酸庆大霉素（2）基本测试原理：五碳或六碳糖结构的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸或硫酸的作用下脱水，生成糠醛（五碳糖）。糖）或羟甲基糠醛（六碳糖），此类产品会与α-萘酚或蒽酮一起显色。

1. α-萘酚显色 (3) N-甲基葡萄糖胺反应（Elson反应） 基本原理：氨基糖苷类抗生素经（酸）水解生成葡萄糖胺衍生物，在碱性溶液中与乙酰丙酮缩合，得吡咯衍生物（I）生成，然后与对二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液（试剂）反应。吡咯衍生物的多羟基被切断，生成红色缩合物(II)。示例：链霉素水解为N-甲基葡萄糖胺，硫酸新霉素和硫酸巴龙霉素水解为D-葡萄糖胺。他们都有这样的反应。 （4）麦芽酚（）反应的基本原理：麦芽酚与三价铁离子在微酸性溶液中形成紫红色配位化合物并显色。这是链霉素的特征反应。麦芽酚的生产：在碱性溶液中，链霉素结构中的条纹发生分子重排，扩环形成六元环，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再消除链霉素生成麦芽酚。 Gynol（α-甲基-β-羟基-γ吡喃酮）。 (5)坂口反应基本原理：这是链霉素特有的反应，是链霉素的水解产物。链霉素溶液被氢氧化钠水解生成链胍。链霉亲和素和8-羟基喹啉（或α-萘酚）分别与次溴酸钠反应，各自的产物相互作用形成橙红色化合物。颜色。 （6）硫酸盐反应的其他方法（因此类药物大多为硫酸盐） 色谱法：薄层色谱法、高效液相色谱法 光谱法：IR、UV 注：BP对庆大霉素的紫外鉴别：庆大霉素无共轭双键体系，因此有在紫外区无紫外吸收。

据此，在240-330nm范围内应该没有紫外吸收。 3、特殊杂质检验及成分分析（1）链霉素中链霉素B检验薄层板：硅胶G薄层。显色剂：甲苯-冰醋酸-甲醇（50:25:25） 方法：以甘露糖为对照品，采用标准对照法比较斑点颜色。 (2)奈替米星有关物质检查。各国药典均采用色谱法（HPLC或TLC法）对本类部分抗生素的有关物质进行检查。 Ch.P主要采用TLC方法。例如，硫酸奈替米星有关物质的检查采用标准对照方法，比较斑点颜色的深浅。 (3)成分测定：此类药物大多以同系物的混合物形式存在，同系物的效价和毒性各不相同。必须控制它们的相对含量以保证药品质量。庆大霉素C组分的测定 1）中国、英国、美国、日本等国药典均规定应控制庆大霉素中C1、C2、C1a、C2a的相对百分含量。全部采用HPLC法测定。 2) 色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-冰醋酸-甲醇(25:5:70)配制的0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液为流动相；检测波长为330nm；按C2组分计算，理论塔板数应不低于2000。 C2a和C2峰的分辨率应满足要求。对于重复进样，相对标准偏差（RSD）应小于2.0%。采用内标-峰面积归一化法计算各成分的相对含量。

图讨论： (1)柱效：按C2峰计算，理论塔板数不少于2000。 (2)流动相：应适当控制流动相的极性(适当调整甲醇比例)：极性太强，出峰快，分离差；如果流动相的极性太弱，出峰速度就会太慢。 （3）衍生化试剂（邻苯二甲醛、巯基乙酸）和吲哚衍生物的稳定性，在330nm处有强吸收； （4）离子对试剂浓度的影响（注：庆大霉素常以硫酸盐的形式存在） 4、含量测定的法定方法：目前各国药典主要采用微生物测定法测定其效价。主要研究方法：多数研究者特别关注微生物学方法、免疫学方法、色谱法等定量分析方法。测定中的检测方法：该类抗生素大多无紫外吸收，不能直接用紫外或荧光检测器检测。需要进行柱前或柱后衍生化。所用衍生试剂包括邻苯二甲醛、1,2-萘醌-4-磺酸、2,4,6-三硝基磺酸、1-氟-2,4-二硝基苯、9-芴氯甲酸甲酯、茚三酮等。 实例：猪组织中庆大霉素和新霉素的HPLC色谱条件：BDS C18分析柱；乙腈-水(85:15)为流动相；流速1.0ml/min；荧光检测器，λex=260nm，λem=315nm。样品处理：取适量样品（肝、肾、肌肉），加入磷酸盐缓冲液（Ph=7.4），室温孵育1小时，然后加入三氯乙酸，均质30秒，离心（3500r/min） ）4℃反应15分钟，将上清转移至另一试管中，加入离子对试剂（己烷磺酸钠溶液）。

固相柱萃取纯化，乙腈-0.02mol/L己磺酸钠(55:45)洗脱。将洗脱液与9-芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)混合进行衍生化反应。 15分钟后，加入甘氨酸终止反应，注入适量进行测定。光谱结果与讨论： 1）用FMOC-Cl衍生化可以得到具有强荧光的衍生物。当pH 8.0反应时，衍生物可稳定12小时。参见图 11-7。 2)测得庆大霉素和新霉素各成分的提取回收率在75%~86%之间；日内、日间RSD均小于10%；检出限分别为0.05μg/g和0.1μg/g。 (信噪比=5)；定量限为检测限的2倍。在0.1μg/g-1.0μg/g范围内，被测组分浓度与响应值r0.999有良好的线性关系。第四节 四环素类抗生素（ ） 该类抗生素由四个环组成，故统称为四环素类抗生素。 1、化学结构和性质 结构中不同的取代基R、R′、R″、R构成各种四环素类抗生素。常见结构如下： 二、性质 （1）酸度、碱度及溶解度：呈弱碱性、弱酸性，为两性化合物。 (2)光学活性：具有不对称碳原子，因此具有光学活性； （3）紫外线吸收和荧光性质： （4）与金属离子形成配位化合物： （5）稳定性：四环素类抗生素对各种氧化剂（包括空气中的氧）、酸、碱不稳定。

差向异构特性：四环素抗生素在弱酸性（pH 2.0-6.0）溶液中会发生差向异构。降解特性：酸性条件下（pH2）酸性降解，生成脱水四环素（ATC）。反应式如下： 碱降解：在碱性溶液中生成非活性异构体。反应如下： 二、鉴别试验 1、浓硫酸反应； 2、三氯化铁反应； 3、薄层色谱： 应用实例：盐酸土霉素鉴定用薄层板的制备：硅藻土EDTA-2Na溶液-甘油（95：5）为粘合剂；展开剂：取4%EDTA-2Na溶液(pH 7.0)5ml，加入200ml乙酸乙酯-氯仿-丙酮(2:2:1)作为展开剂。显影后，用氨气熏并在紫外光（365nm）下检查。 4、HPLC法：ChP和USP(25)采用HPLC法鉴别盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸多西环素、盐酸金四环素等。含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间本品应与对照品主峰的保留时间一致。 3、特殊杂质检查 1、有关物质：四环素类中的有关物质主要是异构体杂质、降解杂质（ETC、ATC、EATC）等。 2、杂质吸光度：采用中国药典规定的盐酸四环素杂质吸光度测定方法方法如下：将本品加0.8%氢氧化钠溶液制成每1ml含10mg的溶液，用分光光度法，置于4cm吸收池中。在530nm波长处测定，加入0.8%氢氧化钠溶液5分钟后吸光度不得超过0.12（进样）。

4、含量测定：对于四环素类抗生素的含量测定，目前各国药典均采用HPLC法。实施例：盐酸四环素含量的测定方法： 色谱条件及系统适用性试验：采用十八烷基键合硅胶为填充柱（pH值适应范围大于8.0）； 0.1mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2mol/L磷酸氢二铵溶液(68:27:5)，以氨试液调pH至8.3为流动相；流速1毫升/分钟；柱温35℃；检测波长为280nm。取盐酸四环素与有关物质的混合溶液20μl，注入液相色谱仪测定。 4-表四环素、表水四环素、盐酸四环素、盐酸金四环素、脱水四环素峰间的分离度均应符合要求。第五节 抗生素药品中高分子杂质的检验 一、抗生素药品中高分子杂质的定义、来源及分类 高分子杂质按来源可分为外源性杂质和内源性杂质两类。外源性杂质包括蛋白质、多肽、多糖等杂质，或抗生素与蛋白质、多肽、多糖等的组合。内源性杂质是药物自身的聚合物。聚合物是在制造过程中产生的，也可能在储存过程中形成，甚至可能是由于使用不当而产生的。二、聚合物杂质的基本结构及特点 1、基本结构 （1）青霉素类抗生素：青霉素聚合物：青霉素的聚合方式有两种：一种是母核参与反应，一种是侧链参与反应在反应中。

聚合物结构如下： (2) 头孢菌素家族 2. 聚合物杂质的特征： A. 发酵过程中产生的任何蛋白质和蛋白质片段都可以带入产品中； B、由不同聚合度、不同机理的聚合反应形成的聚合物，可以不同程度地降解； C. 对于以异构体存在的样品，均聚和杂聚反应同时发生； D、聚合物杂质的种类和数量与生产工艺密切相关。图11-8 羧卞西林二聚体分析 3. 控制聚合物杂质的主要方法有反相高效液相色谱法、凝胶色谱法和离子交换色谱法。 1、凝胶色谱法测定聚合物杂质的原理：利用凝胶色谱的分子筛功能，药物分子可以自由进入凝胶颗粒内部，而聚合物杂质则被排除在外，不能进入颗粒内部。 2。聚合物杂质的控制方法：具有不同结构的聚合物杂质通常具有相似的生物学特性，因此通常控制药物中聚合物杂质的含量。 （1）自我控制和外部标准方法的原理（2）缔合形成的条件3。用于分析聚合物杂质的G-10凝胶色谱系统可以分为两种类型：HPLC系统和简单的测量系统。满足以下两个条件：聚合物杂质分离系统中的蓝色葡萄糖的理论板数为2500/m，尾部因子在0.75-1.5之间。 b.关联峰面积（RSD）的相对标准偏差为5％。 （1）简单测量系统：由恒定流动泵，紫外线检测器，色谱工作站和色谱柱组成。

（2）HPLC系统：不锈钢柱装有 G-10（自定义）。湿柱包装，工作压力小于75PSI；流动阶段A：具有pH 7.0的磷酸盐缓冲液；流动期B：0.01％十二烷基硫酸钠溶液，检测波长254nm，注射50μl。根据外标方法计算。要考虑的问题：1。使用汞方法对药典决定对青霉素含量含量的确定背后的原则是什么？使用的白空间的特征是什么？当使用这种方法确定青霉素含量时，您应该注意什么？ 2。通过碘化法确定普罗脱教的原理是什么？影响测量准确性的主要因素是什么？应该控制哪些条件？为什么我们需要使用参考物质进行同时测量？ 3。简要描述链霉素主要鉴定反应的原理和方法。 4。为什么中国药典规定庆大霉素C成分的确定？什么方法用于测量它？ 5。四环素抗生素的特殊杂质是什么？我们为什么要控制这些杂质？哪种方法用于控制盐酸盐乙烯环素的特殊杂质？ 2。炭疽病显示出差异，四环素，四环素，四环素，脱水，四环素，四环素，等乙烯环素抗生素，四环素抗生素1。母核2。参与侧链 * * 1。参与 * 1。在低浓度的某些生物体上有效的化学物质术语对生命活动具有特定的抑制作用。”资料来源：主要是微生物发酵合成，然后是半合成或化学合成。药物特征1。较低的化学纯度：主要是由三种现象引起的，即“更多的同源物，更多的异构体和更多降解产物”。

2。主动成分容易变异：例如成分变化和组成变化3。稳定性差：这是由于抗生素分子包含许多反应性基团的事实。继发酰胺γC= O 1690酚类羟基γC-O 1250β-内酰胺γC= O 1780苯环γC= C 1620胺盐γN+-h 3100〜2600〜2600羧基离子γCooo-1585，1585，1400 ，3180归因于波数cm-1归因于波数cm-1（1）（2）（3）