比格犬种植体周围炎骨缺损模型的建立.pdf

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· 34 ·医学研究生杂志 Vol. 29 No. 1, 2016年1月~ra，Vo1．29，No． 1，，2016专著（基础研究） 比格犬种植体周围炎骨缺损模型的建立 尹炜，刘向辉，孙伟革，程毅程，张蕾，王晨晨 [摘要] 目的 目前尚无公认的快速建立种植体周围炎骨缺损动物模型的方法，本研究为深入研究种植体周围炎骨缺损后骨再生提供快速建模途径。 方法 选取6只比格犬，每只比格犬即刻植入6颗种植体，待种植体与骨融合3个月后，采用随机数字表法随机选取3只比格犬作为实验组，采用皮瓣局部去骨+丝线结扎+高糖饮食相结合的治疗方法；另3只犬作为对照组，行常规Ⅱ期手术。术后1个月通过牙周检查、种植体周围龈沟液（PISF）、X线、目测及组织切片等方法观察并比较种植体周围骨缺损程度[缺损深度（DD值）、缺损宽度（DW值）、牙槽骨水平（BL值）]。结果实验组种植体周围龈沟液含量明显高于对照组[（1.954～0.28）×LVS（1.02～40.14）I×L，P < 0.01]。实验组种植体颈部牙槽嵴高度降低、种植体间牙槽间隔消失，对照组未见明显骨吸收。两组垂直骨吸收量差异有统计学意义[（3.08～40.84）mm（0.324～0.08）mm，P < 0.05]。

实验组种植体表面覆盖大量菌斑及软鳞，牙龈不同程度红肿，局部皮瓣打开暴露种植体后，丝线外露，出现不同程度的骨缺损，DD值、DW值、BL值与对照组比较差异均有统计学意义[（3.18～41.36）mm（0.26～40.08）mm、（2.38～40.73）mm（0.21～40.04）mm、（1.70～40.79）mm（0.15～40.05）mm，P < 0.05]。组织切片显示实验组种植体颈部破骨细胞增生活跃。结论局部去骨+丝线结扎+高糖饮食联合应用可快速建立种植体周围炎骨缺损模型，适合在动物研究中推广应用。 【关键词】 犬； 移植物周围炎； 骨缺损； 动物模型【中图分类号】 R782．1[文献标识码] A[文章编号] 1008—8199(20t6)01-0034-06[DOI] 10．16571/j．enki．1008．8199．2016．01．008 - 尹炜，刘向晖，孙伟革，程义成，张蕾，王晨晨 (ogy，TheP ，istry，An—，N ang，China)[] fect — ，s( )。 Then，． oin— ，，，． ，rmed。 ，，，and —，，．一个月后，口腔指数及PISF均(DD=3.18mm, DW = 0.21mm, BL=0.15mm) (P0.05)；通讯作者：刘向辉，E-mail：@sina. goup (DD=0.26mm, DW = 0.21mm, BL=0.15mm) (P0.05)；口腔指数及PISF均(DD=3.18mm, DW = 2.38mm, BL=1.70mm) (P0.05)；通讯作者：刘向辉，E-mail：@sina. goup (DD=0.26mm, DW = 0.21mm, BL=0.15mm) (P0.05)；通讯作者：刘向辉，E-mail：@sina.组（DD=3.18mm，DW=0.21mm，BL=0.15mm）（P0.05）；通讯作者：刘向晖，E-mail：@sina。[] ;Pefi-;;采用丙泊酚注射液（武汉乐泰制药有限公司）控制麻醉深度，保证实验犬能自主呼吸。

麻醉起效后，微创拔牙成为牙齿缺失患者的首选方法，但种植体周围炎（peri-）仍是种植修复后最常见的牙窝。选取6个拔牙窝，逐步进行种植体腔预备，主要并发症为0.9%，主要表现为种植体周围软组织发炎、骨组织吸收，最终导致种植体松动脱落、种植体修复失败。种植体扭矩控制在35～55N·cm，术后紧密缝合愈合螺钉，术中静脉注射头孢替安注射液+0.9%氯化钠注射液（上海新亚药业有限公司）。本研究采用局部取出种植体的方法建立比格犬口腔环境中的动物模型，待骨整合3个月后，实验组行Ⅱ期手术。实验组采用皮瓣凿除、骨移除、丝线结扎及高糖饮食相结合的方法，1个月后将种植体颈部周围皮质骨与愈合基台连接，紧密缝合伤口，成功快速建立理想的实验性种植体周围炎骨缺损模型。对照组行常规Ⅱ期手术连接愈合基台，1周后拆除模型，拆除缝线，检测各项牙周指标及种植体周围龈沟液（PISF），拍摄X线测量骨高度（作为基线数据）。同时实验组在种植体颈部基台处采用丝线结扎，并喂养高糖软食。对照组不予特殊治疗。

1个月后测量牙周指数、提取PISF、拍摄X线片。动物处死后取出下颌骨标本，开瓣后目测测量种植体颈部骨缺损指数，最后制作光镜硬组织切片，种植体制作在南京军区总医院比较医学中心进行。按随机数字表法将动物分为实验组和对照组，每组3只，对照组以普通饲料喂养，实验组给予高糖饮食、自由饮水，环境温度19～22℃、湿度50%～60%，参照孟焕新的方法观察周围软组织情况…种植体周围软组织的检查：①菌斑指数（PLI）：综合评价比格犬口腔卫生状况，采用-Hein方法评分； ②龈沟出血指数(SBI):综合评估种植体周围牙龈炎症状况,采用β-Hein法计分;③上海碧泰生物科技股份有限公司),电子游标卡尺(0~150mm,分辨深度(PD):了解种植体牙周支持组织的丢失情况,取样率为0.O1ram),#滤纸条(上海碧泰生物采用专用牙周刻度探头进行测量)。

技术有限公司）、数字口腔X光片（德国西诺德公司）、硬组织切片机（北京大学口腔医院提供）、光学显微镜（31本）、高清数码相机（日本佳能）。1.3.2 PISF 的采集与测量 每颗种植体分别在硬组织和远端两处采集PISF。比格犬口腔内用无菌棉球隔离水分（种植体腔内插入滤纸条（2mm×8mm）），高清数码相机（日本佳能）。1.2 实验方法 按照0.1 mL/kg体重，用游标卡尺测量并计算犬后肢内侧湿润面积。切去干燥部分，放入管内（含1%BSA-PBS，pH=7.4），肌肉注射盐酸赛拉嗪（速眠欣Ⅱ号，吉林省敦化市圣达动物药业有限公司）全身麻醉，术中静脉滴注丙烯腈，70℃保存待检。参照邹德荣等方法，将1.0～3.5μl与PISF成分相似的犬血清滴于滤纸条上，固定48h后取出，放入新鲜脱钙液中进行脱钙，乙醇系列计算浸湿面积，采用直线相关t检验进行统计学分析。组织切片机垂直于种植体长轴方向切片(厚度，手工打磨至30μm，甲苯胺0.986，P0.01)，计算回归方程，其中，用PISF蓝法染色，在光学显微镜下观察种植体颈部骨组织量，Y为滤纸条湿润面积，最后根据实际测量结果改变湿润组织量。

由面积计算PISF含量，公式如下：1.4 统计学分析统计学分析采用.0软件进行，，= -3.134+7.712X分析，定量数据以均值±标准差（x±s）表示，临床牙科1.3.3 X光片传统角线法会使图像发生扭曲，将X光检查中的PISF含量、骨质流失三项指标进行组内比较，以减少每次拍片的误差，使结果更加准确。实验采用配对t检验和平行投影法使用基线数据和1个月后的数据，每次保证同一工人使用相同检验，取差值进行组间协方差分析；采用骨缺损仪视觉测量(管电压60kV、管电流7mA、曝光时间0.16S、剂量0.)，固定传感器位置和投射角度，pt≤0.05认为有统计学意义。采用两个独立样本t检验对骨缺损三项指标进行组间比较。最后利用内置软件测量种植体底部到牙槽嵴顶部的距离(每个种植体的倾斜角度不同，测量值按照种植体长度10mm常数值按比例折算2.1临床指标检查基线时口腔卫生控制良好，实际数据)，公式如下：实验组与对照组的PLI、SBI、PD差异均有统计学意义(P最终数据/10=实测种植体长度测量值0.05)。局部去骨+丝线结扎+高糖饮食测量3次，取平均值。

所有种植体均进行线观察，1个月后实验组3项临床牙周指标均明显增加。测量全身垂直骨高度，计算引入刺激前后垂直骨丢失量，基线与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。1.3.4 骨缺损目测测量比格犬采用静脉注射空气处死。2.2 PISF测定基线时，对照组与实验组PISF差异无统计学意义[（0.96±0.17）IxL（0.94±0.18）IxL，P<0.05]。1个月后实验组PISF明显高于对照组[（1.954-0.28）ILL（1.02±0.14）L，P<0.01]。 2.3 影像学检查基线通过X线片测量所有种植体在颈部及舌侧4个视野及远端舌侧的骨缺损指标，最后取平均肩台，与牙槽嵴顶平齐，无骨缺损。测量值记录如下：①缺损深度（DD值）：骨缺损底部至种植体顶部的垂直距离接近种植体长度（10mm），对照组与实验组之间差异无统计学意义（以螺纹上限为参考，以缺损底部为基准）；②缺损宽度（DW值）：缺损牙槽骨冠部至种植体顶部的垂直距离接近种植体长度（10mm）。

1个月后实验组可见种植体颈部与种植体表面的水平距离； ③牙槽骨水平（BL值）：牙槽部牙槽嵴高度降低、种植体间牙槽间隔消失，而对照组未见明显骨吸收，三组间垂直骨丢失有统计学意义（1.3.5组织学观察用骨科锯将整个下颌骨切成带有种植体的单个小标本[（3.08-4-0.84）mm vs （0.32±0.08）mm，P 0.05]，10%甲醛溶液0.05]。见图1。表1 实验前后（4-s）犬种植体各项临床指标测量值比较（i-4S）与基线相比，P < 0.05；与对照组相比，#P < 0.05·38· of ，Vol. 29, No. 1, 2016年1月, Vo1.29, No. 1, . 2016周围组织的炎症反应，IL-1是含糖量较高的破骨细胞活化因子，更利于细菌聚集和菌斑形成，此方法利用主要成分，其含量与骨吸收呈正相关。IL-22制作简单，但建模时间过长。另外，有学者在比格犬身上建立了牙周炎模型，种植体植入后，祖细胞抑制破骨细胞形成，IL-22可能参与修复牙周炎模型。用此方法建立的牙周炎与人类牙周病患者牙周炎引起的软硬组织破坏十分相似，至于其组织病理学和微生物免疫检测，与牙周炎发生发展监测指标十分相似。

TNF-α在上皮功能等方面是否一致，尚待进一步研究。它主要由单核细胞和巨噬细胞产生，主要功能是促进Lang和。认为由于种植体周围结缔炎性骨吸收和程序性细胞死亡，因此也可以作为监测种植体周围炎性骨缺损的标志物。MCP-1是一种能促进种植体内形成炎症微环境的细胞因子，与免疫反应和种植体周围组织的快速破坏密切相关。本实验采用上述三种方法比较生理变化的发生和发展。临床研究表明，牙周手术人为控制的骨缺损程度、丝线结扎量、种植体内软组织炎症的临床指标也呈正相关。此外，闫翔等6位学者认为ALP也能持续供应营养物质。这三种方法的综合效应不仅考虑了局部作为牙周破坏的敏感指标，还考虑到了全身因素。从实验结果可以看出，实验组所有种植体在综合效应一个月后均出现了较大程度的骨缺损和破坏。正因为如此，学者们对种植体逐渐产生了兴趣。可以看出，本研究采用的综合方法可以为骨缺损后骨再生的动物研究提供快速建模。本实验也证实了PISF的量可以间接评估种植体周长。

各种方法单独使用是否能得到相同程度的种植体周围炎症还有待进一步研究。葛春成、田涛等采集PISF，比较其量的变化并分析其中相关活性成分的含量，在早期监测种植体周围炎的发生发展。但该实验仅检测到PISF含量的变化，PISF中各成分是否随种植体周围炎的严重程度而变化有待进一步研究。[1]孟焕新.牙周病学[M].第4版。北京：人民卫生出版社，2014：129-134。[2]邹德荣，刘逸文，陈毅，等.牙周炎患者PISF中IL-8含量的研究。目前，在建立种植体周围炎骨缺损的研究中，主要有5种测定方法[J].上海口腔医学，2001，10(4)：339-341。方法：①牙槽骨去骨法，通过手术瓣膜人为去除种植体颈部周围皮质骨[3]，Al-Ri~iyMQ,,等。-此法可人为控制骨缺损程度及性状，骨吸收明显，建模时间短，但缺乏细菌的主导作用[J].i，2014，13(8):1160-1168。②丝线结扎[4]Ata-AllJ，Ata-AllF,-刺激法，将丝线结扎于种植体颈部愈合基底部，通过外界刺激引入龈下细菌引起炎症，等。B_a1s[J]，2015，24(1):13·18。用钢丝及纱布结扎种植体软组织袖口，成功建立接种物[5]MaiR,,,等。 ③接种致病菌法是在种植体周围龈沟内人工接种放线菌(Aa)和牙龈卟啉单胞菌(Pg)，此法建模准确度高，但需事先分离培养病原菌，手术成本高；④持续咬合创伤法是通过正畸装置引入持续的机械力，此法建模效果不稳定、操作较复杂，仅当正畸外力超过骨生长因子时才有效。⑤饲喂高糖饮食[8] 。 elop—法，通过长期饲喂高糖食物，使动物口中的gs． [16] 闫翔，苏晗，谭宝春，等. 两种不同类型固定矫治器的疗效比较 [10] 孙志新，张云涛. 口腔种植体周围炎与白细胞介素的关系[J]. [17] 葛春城，田涛. 种植体周围组织中单核细胞趋化蛋白-1（IL-α）（IL-8和）-on的表达[J]. 临床口腔医学杂志，2014，30（6）：331-333。 [18] ，，，，等。g，2010，39（5）：478-485。 [12] 葛春城，田涛.单核细胞趋化蛋白-1（IL-α）（IL-8和）-1在种植体周围组织中的表达[J].临床口腔医学杂志，2014，30（6）：331-333。[18]，，，，等。g，2010，39（5）：478-485。[12]，，，，等。[J].牙周病杂志，2005，-6，IL-8，IL-10，IL-12和。（1）：51-59。[J]。Ucal，2011，16（4）：[19]杨少强，廖旭辉，顾伟旺，等。犬牙周炎动物模型的建立e518-521。[J]。口腔医学，2011，31（12）：746~50． [13] 罗志，王华，孙志，eta1．-22，IL-22R和[2O]，．：