南非叶：抗癌植物扁桃斑鸠菊化学成分的研究

南非叶：抗癌植物扁桃斑鸠菊化学成分的研究

第一章简介

1.1 研究背景及意义

目前，癌症已成为威胁人类生命健康最严重的疾病之一。 据美国癌​​症协会统计，2007年全球各类癌症新发病例超过1200万例，其中发达国家540万例，发展中国家670万例。 2007年全世界因各种癌症死亡的总人数约为760万人。 其中，发达国家有290万例，发展中国家有470万例。 世界上平均每天约有 20,000 人死于癌症。 从目前癌症的发展趋势来看，未来几十年将是全球癌症高发之年。 预计随着全球人口的快速增长和人口老龄化，到2050年全球癌症发病人数将增至2700万，癌症死亡人数也将增至1750万。 统计显示，无论在发达国家还是发展中国家，乳腺癌都是女性发病率和死亡率最高的癌症，是全世界女性的第一大天敌。 2007年，全球乳腺癌新发病例多达130万例，死亡人数为46.5万人[1]。

目前，癌症的主要治疗方法有手术、化疗、放疗、生物治疗和基因治疗。 手术会与其他疗法相结合，化疗和手术相结合在癌症治疗中非常常见。 临床上常用的抗癌药有七类，分别是环磷酰胺()、甲氨蝶呤()、氟尿嘧啶()、阿霉素(,)、表阿霉素()、紫杉醇(,紫杉醇)和紫杉醇(,)。 这些抗癌药物根据来源可分为两类。 第一类是合成药物，如环磷酰胺、甲氨蝶呤等。剩下的就是第二类，多是从植物、动物和真菌的代谢产物中分离出来的。 其中以紫杉醇最为特殊。 它是直接从植物中分离出来的。 1971年，美国人和他的同事首先从美国西部大片森林中生长的红豆杉（，）的树皮中分离出它。 对卵巢癌、乳腺癌有良好的治疗作用[2]。

从广义上讲，草药或天然产物是人类对抗癌症的重要武器。 化学科学家从植物界中分离出了多种有效的抗癌活性成分。 除紫杉醇外，还有从夹竹桃科植物长春花中提取的长春碱、长春新碱，以及从珙桐科植物中提取的喜树。 从雷公藤的果实和叶中分离出的喜树碱和羟基喜树碱，从雷公藤根中分离出的雷公藤碱甲酯、雷公藤乙酯、雷公藤甲素等。 用草药治疗疾病并不是什么新鲜事。 自古以来，人类就开始服用草药来治疗各种疾病。 即使在手术和药物合成技术发展的今天，许多人仍然愿意尝试单独使用草药或与其他治疗方法结合使用。 治愈癌症。 因此，对草药或天然产物的活性成分的研究是寻找治疗癌症和其他疾病的药物的广泛来源之一。

1.2 杏仁斑鸠菊概述

杏仁斑鸠菊（L.，俗名）是菊科（或斑鸠菊）属的植物，是一种生长在非洲赤道地区的2-5米高的小灌木。 在该属中，杏仁斑鸠菊可能是使用最广泛的，既可作为食用蔬菜，又可作为药用植物。 正因为它是当地居民日常食用的蔬菜，当地女性乳腺癌发病率极低，引起了科研人员的兴趣。

1.2.1 杏仁斑鸠菊化学成分研究进展

对杏仁斑鸠菊化学成分的研究始于 20 世纪 60 年代末。 目前，已从杏仁斑鸠菊中分离出5类32个化合物。 它们是一种甾醇、三种类黄酮、六种倍半萜内酯、十种甾体皂苷和十二种脂肪酸。 经过薄层色谱法（phy,TLC）、高效液相色谱法（,HPLC）、紫外吸收光谱法（opy,UV）、质谱法（,MS）和气相色谱-质谱法（-,GC-MS）分析后， 3.从杏仁斑斑鸠菊中分离得到的黄酮类化合物有：洋地黄黄酮(,1)、洋地黄黄酮-7-0-&-葡萄糖苷(-7-0-p-,2)、洋地黄黄酮。 7-0。 p。 葡萄糖苷(-7-0-p-,3)[3]。 从杏仁斑斑鸠菊中分离出的甾醇是 7,24(28)--diene-3p-ol [7,24(28)-3p-ol,4][4]。 通过GC对十二种脂肪酸进行酯交换。 它是经过MS分析并与质谱数据库进行比较后得到的[5]。

1.2.2 杏仁斑斑鸠菊活性研究进展

对杏仁斑鸠菊活性的研究略晚于其化学成分的研究，但相关研究不仅包括其全株（主要是叶片）的活性研究，还涉及各类分离化合物[13] -15]。

1.2.2.1 抗氧化活性

杏仁斑斑鸠菊的抗氧化活性是文献中最常报道的研究类型。 抗坏血酸（维生素C）和总酚类物质是植物中主要的抗氧化成分，因此测定斑鸠菊中这些物质的含量可以衡量植物的抗氧化活性。 ObohG测定了杏仁斑斑鸠菊鲜叶、焯叶和干叶中抗坏血酸（维生素C）和总酚的含量，并进行自由基清除实验来测定其抗氧化活性。 结果如下表1-1所示[16]。

单位为毫克/100克。

。 等人通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(2,2--1-,DPPH)和2,2'-偶氮双-(3-乙基苯并噻唑啉-)检测了斑鸠菊叶不同溶剂提取物的抗氧化活性。 6-磺酸)-二铵盐[2,2'-(3--6-),ABTS]自由基清除实验，筛选杏仁斑鸠菊丙酮、甲醇和叶子水提取物的抗氧化活性。 甲醇提取物显示出高活性。 DPPH和ABTS-+叶的自由基清除能力分别为75-99.3%和96.2-100%。 其自由基清除能力比丁基羟基甲苯更强，与儿茶酚类物质去除能力不相上下。 水提取物活性最低，其清除DPPH和ABTS叶自由基的能力分别为29-88%和76.8-98.3%[5]。 通过对胡萝卜素和亚油酸的偶联氧化反应，生成黄酮类物质洋地黄(1)和洋地黄7-Op。 分析了从斑鸠菊杏仁叶中分离出来的物质。 测量了葡萄糖苷 (2) 和洋地黄 7-Op-葡萄糖苷 (3) 的抗氧化活性 [3]。 在相同浓度（15 mg.L-1）下，洋地黄黄酮（1）表现出比2,6-二叔丁基对甲酚（ene，BHT）更强的抗氧化活性，而洋地黄黄酮-7-的抗氧化剂Op葡萄糖苷(2)和洋地黄-7-Op-葡萄糖苷(3)的活性远小于洋地黄(2)和BHT。 通过降低DPPH自由基的能力来衡量（19）和（21）的抗氧化活性，结果表明（21）的降低能力强于（19）[17]。

1.2.2.2 抗菌和抗寄生虫活性

研究了斑斑鸠菊叶的甲醇（60%）提取物对九种细菌的抗菌活性。 试验通过琼脂扩散法和最低抑菌浓度法发现，杏仁斑鸠菊叶的甲醇提取物对枯草芽孢杆菌和肺炎衣原体有效。 它对六种细菌细胞具有抑制活性：伯氏大肠杆菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、痢疾志贺菌和金黄色葡萄球菌。 最低抑菌浓度为25 mg-mL-1。 对R. 和 真菌没有抑制活性[18]。 从杏仁斑斑鸠菊中分离出的六种倍半萜内酯化合物 (17)、(18)、(19)、11,13-(20)、(21) 和 (22) 显示出抗菌和抗寄生虫活性 [8]。 (19)、(21) 也显示出抗真菌活性 [19]

1.2.2.3 抗癌活性

.M. 等人。 等发现杏仁斑斑鸠菊的氯仿提取物对体外培养的鼻咽癌细胞有显着的抑制作用，并从中分离出两种具有细胞毒作用的倍半萜内酯化合物（17）和（18）[6]。 .B研究了新型抗癌植物杏仁斑鸠菊叶的水粗提取物对人乳腺癌细胞系（MCF-7）DNA合成的影响。 在无血清和血清刺激的细胞培养基中，以浓度和时间依赖性方式研究了抑制 MCF-7 细胞 DNA 合成的能力。 实验检测的斑鸠菊叶水粗提物浓度在3-200ug-mL-1范围内，发现200ug-mL-1完全抑制癌细胞的DNA合成活性，且无相关性与反应时间的长短有关[20]。 为了阐明杏仁斑鸠菊叶水提取物抑制MCF-7细胞生长的机制，B等人。 继续以浓度依赖性模式研究不同浓度范围（3-200ug-mL-1）的斑鸠菊水提取物的效果。 对单信号蛋白酶 (-,ERK1/2) 活性、DNA 合成和体外癌细胞生长的影响。 实验结果表明，在100ug-mL-1高浓度下，斑鸠菊水提物能有效抑制SUMCF-7细胞DNA合成，但在血清存在下抑制率高达20倍（P<0.005）刺激后，无血清时的抑制率为7倍(P＜O.01)。 杏仁斑鸠菊水提取物处理后的细胞增殖能力显着降低40%，且杏仁斑鸠菊液浓度至少达到10ug·mL-1时才能抑制细胞生长。 在杏仁斑斑鸠菊对ERK酶抑制活性的实验中发现，12.5ug-mL-1浓度即可达到40%的抑制率，但在更高浓度（50-100ug-mL-1）时，其抑制活性会逐渐消失[21]。

1.2.2.4 其他活动

阿威亚SO等人。 研究了斑鸠菊叶甲醇提取物的通便作用。 实验发现，甲醇提取物能显着加速小鼠胃肠蠕动，提高小鼠胃排空能力，显着增加小鼠排便次数和粪便排出量。 对杏仁斑鸠菊的甲醇提取物的化学成分进行检测，发现含有皂苷、苷类、鞣质等化合物，被认为是引起腹泻的主要原因[22]。

有文献报道，用斑鸠菊叶甲醇提取物给怀孕小鼠用药，小鼠在服药后24小时内流产[23]。 文献中也有报道称斑鸠菊叶提取物具有抗血栓作用[24]，并能降低家兔血糖[25]。

第二章 实验部分

2.1 实验材料

2.1.1 试剂

硝酸（AR，上海化学试剂有限公司）、30%过氧化氢（AR，广东光华化工厂有限公司）、甲醇（AR，广东光华化工厂有限公司）、无水乙醇(AR，广东光华化工厂有限公司)、氯仿(AR，汕头市西龙化工厂有限公司)、乙酸乙酯(AR，广东光华化工厂有限公司)、石油醚(60 -90、AR，汕头市西龙化工厂有限公司）、丙酮（AR，上海世仪化学试剂有限公司）、正己烷（AR，国药集团化学试剂有限公司）、正丁醇(AR，上海申博化工有限公司)、甲酸(AR，上海试剂一厂)、四氢呋喃(GR，天津光复精细化工研究所)、柱层析硅胶(200-300目，试剂级，青岛海洋化工厂），硅胶H（试剂级，青岛海洋化工厂），碘（CP，广州化学试剂厂），羧甲基纤维素钠（纯试剂，中国医药（集团）上海试剂公司）。

铁、钒标准溶液(北京核工业冶金研究院，100ug-mL-1)； 锶、钼、铝、硼、钡标准溶液（国家标准物质研究中心，100ug-mL-1）； 钙、镁、钠、铜、锌、镍、锰单元素标准溶液（国家标准物质研究中心，-mL-1）； 茶叶标准（中国科学院地球物理地球化学勘查研究所）； 人发标准（国家地球物理地球化学研究所测绘研究所）。

氘代氯仿、氘代二甲亚砜、氘代甲醇和氘代四氢呋喃购自Sigma公司。 它们的 D 含量均为 99.8%，并含有 0.03%（体积）四甲基硅烷 (TMS)。

2.1.2 示例

杏仁斑斑鸠菊的新鲜叶子是在尼日利亚贝宁湾市采集的。 收集到的叶子用蒸馏水冲洗并均匀地铺在镀锌筛上。 将丝网放置在特殊的干燥箱中。 烤箱温度55-60°C，加热4小时，直至叶子完全干燥。 样品从尼日利亚贝宁湾市进口至美国（植物检疫证书编号：/075，由尼日利亚联邦农业部进口植物检疫局签发），然后通过联邦快递寄往中国。 这些植物样本是由美国杰克逊州立大学的植物学家和教授根据茎叶的形状和颜色进行鉴定的。

2.2 仪器及操作条件

(1)气相色谱法。 质谱仪：日本岛津公司生产。 气相色谱柱：J&WDB-1MS石英毛细管柱（30m*0.25mm*0.25um）； 载气：HE； 电离方式：EI；

扫描方式：全扫描。

（2）顶空固相微萃取仪（-，HS-SPNE）；，美国公司； 100um聚二甲基硅氧烷萃取头，美国公司。

(3)电感耦合等离子体原子发射光谱仪：，。 工作条件：射频功率：1300W； 泵速：1.5mL-min-1； 等离子气体流量：1.5mL-min-1； 辅助气体流量：0.2L-min-1； 雾化气体流量：0.8L-min -1。

(4)陶瓷膜及有机膜分离设备：SJM-DGN、合肥世杰膜工程有限公司。

(5)紫外线。 可见分光光度计：北京瑞力分析仪器有限公司

(6) 红外光谱仪：-IR，

(7)圆盘旋光计：WXG。 四盘旋光仪，上海精科。

(8) 核磁共振仪：，-NMR，瓦里安

(9)高分辨率电喷雾电离质谱仪(-，HRESI-MS)； 6200 系列精密飞行时间质谱仪液相色谱/质谱仪 (-(time-of-)LC/MS) 安捷伦。 仪器参数：离子源温度：325℃； 毛细管电压：3.5KV； 干燥气体（流量）6L-min-1； 雾化气体（氮气）压力：30L-min+1； 热解电压：175V； 锥体电压：60V，Octl RF 电压：250V； 扫描范围：m/z100-3000； 扫描速率：0.-sec-1； 扫描时间：1012.8ms--1； 电离方式：ESI。

2.3 顶空固相微萃取法提取杏仁斑鸠菊挥发性成分实验

称取粉碎后的杏仁斑鸠菊干叶2.0g，放入10mL带塞的提取瓶中，置于顶空固相微萃取加热块上，将活化的聚二甲基硅氧烷提取头插入瓶中，过程中，空瓶在80℃0.5h，250℃汽化室解吸5min，GC-MS分析。

2.4 杏仁斑鸠菊无机元素分析实验

2.4.1 标准溶液的配制：以5%硝酸为基溶液，稀释配制Na、Mg、Ca、Al、B、Cu、Ba、Zn、Sr、V、Mo、Ni、Mn、不同浓度的Fe。 混合标准溶液，浓度见表2.2

2.4.2 样品处理

将干燥的杏仁叶用中药材粉碎机粉碎，过100目筛。 将粉末置于干净的玻璃瓶中并在真空干燥箱中干燥24小时（75℃）。 然后用塞子密封并保存在干燥器中。

所有玻璃仪器和聚四氟乙烯样品溶解杯均在10%HNO3中浸泡24小时，然后用去离子水清洗。

用电子天平准确称取0.5000g茶叶标准样品和人发标准样品各6份，准确称取6份0.5000g杏仁核样品。 将它们放入聚四氟乙烯样品溶解杯中，加入4.5mL浓HNO3，缓慢摇动样品溶解杯，使溶解的内容物充分混合，在80℃预处理加热装置上加热2小时，然后加入1.5mL H202和继续加热几分钟，然后停止加热，冷却后放入微波消解装置中。 溶解。 样品的微波消解应在低功率下短时间间歇地进行。 当功率太高时，反应过于剧烈，容易发生冲罐现象[26]。 因此，消化分为三个步骤。 微波消解步骤的条件如表 2.3 所示。 待样品在这些条件下完全消解后，取出并置于冷却器中冷却至室温。 将消化液转移至50mL容量瓶中。 用去离子水清洗样品杯内壁和杯盖4-5次。 清洗后，将液体同样转移至50mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用。 同时用同样的方法处理两个空白实验，等待检测。 。

2.4.3 元素测定

电感耦合等离子体原子发射光谱仪（asma

、ICP-AES）设定最佳工作条件，制作各元素的标准曲线，并对各样品进行测定。

2.5 杏仁斑鸠菊提取物化学成分的提取与分离

2.5.1 提取和粗分类

将六公斤杏仁斑鸠菊干叶粉放入不锈钢桶中，用85%乙醇溶液在50-60℃下提取五次。 合并乙醇提取物，用旋转蒸发器除去大部分乙醇，得到黑色油状提取物。

用等体积蒸馏水稀释乙醇提取物后，依次用石油醚（60-90℃）、氯仿、正丁醇提取。 得到三部分：石油醚部分(A)、氯仿部分(B)和正丁醇部分(C)。 用旋转蒸发仪除去所有有机溶剂，得到提取物，备用。 杏仁斑鸠菊醇提取物的提取及粗分离流程如图2.1所示。

2.5.2 石油醚A部分的分离

称取300g石油醚提取物A，溶于乙酸乙酯，然后加入5倍（1.5kg）160-200目硅胶。 混合后，蒸干乙酸乙酯，然后使用石油醚。 乙酸乙酯溶剂体系，按以下比例洗脱：100%石油醚、10%乙酸乙酯、20%乙酸乙酯、40%乙酸乙酯、80%乙酸乙酯和100%乙酸乙酯。 洗脱液通过旋转蒸发器后，得到六种提取物，即：A1、A2、A3、A4、A5和A6。 （图2.2）

2.5.2.1 A2 的分离

将所得提取物A2(11.1g)溶解于氯仿中，然后加入1.3倍(14.5g)薄层色谱硅胶。 混匀后，蒸​​发干溶剂，干装于层析柱顶部。 在柱中使用乙酸乙酯。 将石油醚混合溶剂(15:85)湿法加入到725g薄层层析硅胶(1:50)中，加压洗脱，收集等量(250mL)，浓缩并收集于依次编号的小瓶中。 。

16-22号瓶有白色针状晶体沉淀。 点板分析后，成分相同。 经过联合处理，得到组分I。

2.5.2.2 提取物 A3 和 A4 的分离

薄层色谱结果显示，提取物A3和A4的成分大致相同，因此将两部分合并（A3和A4合并记为A3），然后通过柱色谱分离。 合并的提取物重50.9g。 溶解于氯仿后，加入1.4倍（70.3g）300-400目硅胶。 混匀后，蒸​​发干溶剂，干装于层析柱顶部。 在柱中使用乙酸乙酯。 将石油醚混合溶剂(10:90)湿法加入到700g 300-400目硅胶(1:10)中。 使用乙酸乙酯。 石油醚溶剂体系梯度洗脱：10%乙酸乙酯、20%乙酸乙酯、40%乙酸乙酯、80%乙酸乙酯和100%甲醇。 每个洗脱梯度被命名为：A3.1、A3.2、A3-3、A3-4、A3.5 和 A3.6。 其中，从A3.1中分离出3个组分，即组分II、化合物III和组分IV。 将分离的组分重结晶并使用IR和GC进行分析。 MS和NMR方法用于确定其结构。

2.5.2 正丁醇位点C的分离

将25.1g提取物C2用适量甲醇溶解后，加入1.3倍（32.6g）200-300目硅胶。 充分混合后，蒸发干燥溶剂并将其干燥加载至色谱柱顶部。 在色谱柱中使用甲醇。 氯仿混合溶剂(5:95)酒精、10%甲醇、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇和100%甲醇。 接收等量（300毫升），将其浓缩并收集到按顺序编号的小瓶中（图2.6）。 其中，从C1中分离出3个组分，即化合物V、化合物VI和组分VII。 从C2中分离出一个组分，其为化合物VIII。

2.6 杏仁斑鸠菊水提物化学成分的提取与分离

2.6.1 提取和初步分类过程

每次将干燥的杏仁叶约3kg(粉碎)用去离子水浸泡，加热提取多次，保持提取温度在70℃左右，滤渣过筛，得到杏仁斑鸠菊水提物粗品。

将杏仁斑斑鸠菊的粗水提取物离心并通过离心机除去渣。 得到的澄清液首先通过陶瓷复合膜分离设备进行分离。 陶瓷膜的渗透分子量为10万。 收集浓缩液（分子量大于100,000）和渗透液（分子量大于100,000）。 分子量小于100,000）。 分子量小于10万的陶瓷膜渗透物继续用有机膜分离，分子量为1万和1000的有机膜分别分离，分为三类：10万～10000、11100～ 1,000 以及 1 或更少。 最后使用反渗透膜浓缩该分子量范围内的水溶液。 将分子量小于1000倍的水浓缩物用正丁醇萃取数次，合并正丁醇溶液，用旋转蒸发仪浓缩，浓缩成斑鸠菊水提物的正丁醇部分(W)杏仁核，见图 2.4。

梯度洗脱剂体系：100%氯仿、三氯甲烷。 甲醇（98:2）、氯仿。 甲醇（95:5）、氯仿。 甲醇(90:10)、氯仿-甲醇(80:20)、氯仿。 甲醇(40:60)、氯仿。 甲醇 (20:80)，100% 甲醇。 每个洗脱梯度命名为：W1、W2、W3、W4、W5、W6、W7 和 W8。 其中，从W1得到两个组分，即化合物IX和组分X。从W3得到一个组分，即化合物XI。 分离过程如图2.5所示。

样品纯化后，使用IR和GC。 MS和NMR方法用于确定结构。

2.7.3IR分析

将分离出的化合物与溴化钾(KBr)一起压制成片剂，并测量其红外光谱。

2.7.4GC-MS和HR-ESI-MS分析

不同的化合物有不同的GC.MSNI]测试条件，如表2.1所示。

通过HR-ESI-MS测试得到化合物VI和化合物VIII的分子量。

2.7.4核磁共振分析

NMR分析中，组分I，组分IV。 A和化合物IV。 B的溶剂为氘代氯仿，组分II和化合物III的溶剂为氘代四氢呋喃，化合物VI的溶剂为氘代甲醇，化合物VIII的溶剂为氘代二甲亚砜。

2.7.5X射线分析

对于化合物VI，在3.2度<0<30.9度(Rint＝0.066)的角度内收集21053个衍射点数据。 独立衍射点数量为5800个，可观测衍射点为5036个[I>2o(I)]。 所有氢原子均已各向异性细化，并获得所有碳原子的坐标。 最终偏差系数R1=0.040.wR2=0.092，GoodF=1.03。

2.7.6 熔点测定

使用双目显微熔点分析仪对分离的化合物进行3次测定，并对结果取平均值。

2.7.7 旋光度测试

准确称取25.3mg化合物VI，用无水甲醇溶解，并稀释至50mL容量瓶中。 在25度的圆盘旋光计下平行测量旋光值3次，取平均值。

准确称取20.7mg化合物VIII，用无水甲醇溶解，并稀释至50mL容量瓶中。 在25度的圆盘旋光计下平行测量旋光值3次，取平均值。

第三章实验结果与分析

3.1 杏仁斑鸠菊叶挥发性化学成分分析

采用GC-MS对杏仁斑鸠菊干叶挥发性化学成分进行分析，得到总离子流图（m，TIC）如图3-1所示。 使用计算机，并且 (

、NIST）三个谱库，并结合相关文献[27-29]对样品中的挥发性成分进行鉴定，并采用峰面积归一化法对各成分的含量进行定量。 结果如表3-1所示。

从表3.1可以看出，通过OC。 MS 分析从杏仁斑斑鸠菊干叶中分离并鉴定出 59 种化合物。 该植物的挥发性化学成分包括烯烃、烷烃、醇、酮、酯等物质。 其中，烯烃含量最大，为60.81%； 其次是醇（20.05%）、饱和烷烃（9.76%）、酮（5.27%）和酯（3.40%）。 杏仁斑斑鸠菊的主要挥发性化学成分有：4(14),11-桉树脑(20.90%)、石竹烯(18.53%)、百里香酚(15.07%)、1(10),11-(7.78%)、p-紫罗兰酮 (3.70%)、y-依兰烯 (2.34%)、1-三十烷醇 (2.32)、3,7-二甲基-1,3 ,7． 辛三烯 (2.80%) 和 2,6,10,14-四甲基十五烷 (2.27%)。 鉴定的59种化合物中，单萜类化合物8种，占20.07%；倍半萜类化合物14种，占56.99%。 3.2 杏仁斑鸠菊叶中无机元素分析

3.2.1 元素分析线和检出限的选择

电感耦合等离子体原子发射光谱仪可以同时选择多条特征谱线对每种元素进行测量。 本实验对每种元素选择两条谱线进行测量，然后对每条谱线的光谱、强度和干扰进行综合分析和观察。 情况来确定待测元素的最佳分析线。 在相同实验条件下，以硝酸和过氧化氢为介质，平行测定样品空白溶液11次。 以强度对应的浓度值的3倍标准差(S)作为检出限。 结果如表3.2所示。

3.2.2 标准曲线的制备

使用配制好的标准溶液制作标准曲线。 标准曲线的线性回归方程和相关系数见表3.3。 各元素标准曲线线性良好，相关系数均在三个九以上。

3.2.3 无机元素含量测定结果

在选定的最佳实验条件下，对6个杏仁斑鸠菊叶样品中的无机元素进行平行测定，并对5组测定数据进行分析，计算各元素含量的平均值和平均偏差。 表3-4列出了杏仁核叶片中每个无机元素的含量（k）的测量值（k）。 内容的表达是：

从表3.4中，我们知道，除了NA之外，还可以在杏仁核的干燥叶片中检测到13个无机元素，包括人体所需的宏观元素（CA和MG），必不可少的痕量元素（Cu，Zn，Mo，MN和Fe）和其他元素（A1，B，BA，SR，V和NI）。 其中，Ca，Mg，Ai，Fe和Mn的内容物相对较高，均高于100ug.g-1，而Ca和Mg的内容物的含量高达9159+137UG.G-1和3957+33EUG。分别为g-1。 Zn，B，Sr和Cu的内容也相对丰富，均高于10ug.g-1。 BA，V，MO和NI的内容很低，其中NI只能定性地检测到Ni。

3.2.4恢复率实验及其结果

移液管五2毫升样品1溶液中具有已知含量的溶液中的溶液中，添加了基本上与样品浓度一致的元素标准溶液，准备含有5％HN03的溶液并进行测量。 结果如表3-4所示。

恢复率实验结果表明，当添加到标准的定量检测元素的量基本上与样品量一致时，恢复速率在97.37-130.0％之间，符合痕量元素的检测标准[30] [30] 。

3.2.5方法的准确性

为了测试这种实验方法的准确性，选择了国家标准茶标准材料（）和人毛标准材料（）进行验证实验。 结果如表3-6所示。

3.3通过饮酒杏仁核的石油醚分数获得的化合物的结构分析

3.3.1组件I的结构分析

从氯仿再结晶后，成分I变成白针晶体，很容易溶于氯仿和四氢呋喃，可溶于乙酸乙酯，并在甲醇和丙酮中稍溶于在组件I的红外光谱中，吸收峰-1是羟基-OH的拉伸振动吸收峰，-1是CO的拉伸振动吸收峰。 1646和-1是分子中C = C双键的拉伸振动，C = CH键的平面内和平面外弯曲振动产生的吸收峰； 2955、2928、2870、1458和-1是结构中碳氢化合物基团产生的吸收峰。 在计算机搜索后，组件I的红外光谱与（3p，5a，22e，24r）-5a-5a--7,22-Diene-3p-ol之间存在差异）匹配速率为92，因此组件I可能是固醇化合物。

3.3.2组件II的结构分析

从氯仿 - 甲醇溶液重结晶后，成分II变成了白色固体粉末，该溶液很容易溶于四氢呋喃，并在氯仿，甲醇和丙酮中溶解。

在组件II的红外光谱中，-1处的强吸收峰是羟基-OH的拉伸振动峰，-1处的吸收峰是CD键的拉伸振动峰。 2953，2917，2849和-1吸收峰是结构中碳氢化合物基团产生的吸收峰； 吸收峰-1表示该化合物具有长碳链。 -1吸收峰表明化合物结构包含C = C双键。 因此，据推测成分II可能是不饱和脂肪醇或此类化合物的混合物。

在其抽动上可以看到两个主要的大峰，这表明组件II是混合物。 这两个峰的MS模式如图3.5和图3.6所示，但是两个峰的MS模式对结构分析没有更多信息。 由于它们的MS模式具有一系列间隔14 AMU的峰值，因此可以证实它们是长碳链化合物[31]。

3.3.3化合物III的结构分析

从氯仿 - 甲醇溶液重结晶后，化合物III变成了白色固体，很容易溶于氯仿和四氢呋喃，并在甲醇中溶于甲醇，MP：61-62度。 在化合物III的红外光谱中，-1位置是羰基拉伸振动吸收峰，当简单的脂肪酸是二聚体时，羰基吸收峰位于那里[32]。 2917、2849、1463和-1是结构中碳氢化合物基团产生的吸收峰。 -1处的吸收峰表明该化合物包含长碳链结构。

3.3.4组件IV的结构分析

GC。 MS分析发现，分量IV是混合晶体（见图3.17）。 重结晶给出了无色针状晶体第四部分。 A和白色粉末第四部分。 B.使用GC。 女士与IV。 A和IV。 b分析，结果显示了组件ⅳ。 A仍然是混合晶体，而组分IV。 B本质上是纯化合物（见图3.18）。 比较图3.17和图3.18中每个峰的MS模式，我们发现图3.18中的峰对应于图3.17中的第二个峰。 因此，组件IV包含两个化合物2和化合物3。

与文献中的碳氢化合物NMR数据进行比较[46] [47]，发现化学位移值非常匹配，但是当与特定的碳氢化合物位置相对应时，它们与文献有所不同。 这些差异主要集中在类黄酮粘子和取代的糖基团体上。

在类黄酮类良酮上，文献将较大的化学位移值（＆161.575）与C5相匹配，而C9的化学位移值为＆157.392。 但是根据图3-47，C9的化学位移应大于C5。 原因如下：

尽管C5和C9都在同一苯环上，但C9也与大型共轭结合，由五个N电子（C2、3、4、9和10）和两个P电子组成（位置1）。 六元环连接。 两个大共轭环的连接处的碳具有比其他位置的碳更高的化学位移值。 例如，在萘结构中，位置9和10（＆IS 133.45 [35]）的碳化学位移大于位置1至8的碳化学位移（其中1、4、4、5 ，以及8＆IS 127.84，碳2、3、6和7的＆＆＆＆＆＆＆＆＆＆＆＆of是125.75 [35]”）。在C6和C8上，可以确定H和J的化学位移值，因为C6和C8分别在C9和C5的PARA位置，在表3-14中，＆6.475（氢H）仅与C9的信号，而＆6.804（氢J）只有一个与C5相关的信号。这两个氢与para碳脱离四个键没有信号。根据GHMQC图。与99.978的C8连接，＆6.804氢J）连接到C6＆95.174。 ，四个碳（1，4）位于Ortho到碳9和10、5和8位）化学转换和128.84，而碳9和10碳（2、3、6和7）和125.75。 根据GCOSY数据的取代，根据GCOSY数据，根据GCOSY数据，相关氢与GHMQC数据之间的耦合常数，碳2“至碳5”相应氢峰的化学位移值为3.280、3.326、3.197，3.197，3.197，3.197，3.197，和3.455，不是文献中描述的相应关系（表3.15）。

3.6分析扁桃体菊花水水水水水的收入化合物的结构分析

3.6.1化合物的结构分析结

化合物是无色块晶体，熔融旅程78-80“ C，可溶于乙醚和乙酸乙酯，略溶于乙醚和乙醇，并且在水中不溶。

在化合物的红外光谱中（图3.49），由于圆柱体和羟基的强烈支撑，内部羧酸形成了3300-2的广泛吸力峰：2923，2852，1465和-1是由由结构中的碳氢化合物底座。 吸收峰； -1是c = O的伸缩振动吸收峰； -1是CO的伸缩振动峰； -1吸收峰表明该化合物包含长碳链结构。 计算机检索后，红外光谱库中该化合物的红外光谱和红外光谱的红外光谱为96.24，而SDBS数据库中的数据库[35]的红外光谱图[35]相比[35]，比较，比较。结果还表明，十是，因此可以推断化合物可以是二霉菌（，7），并且结构如图3-48所示。

3.6.2组件x的结构分析

成分X是无色针形的晶体，很容易溶于氯仿和乙酸乙酯，可以溶解在丙酮中，而在水中不溶于水中。

在组分X的红外光谱中（图3-50），-1是羟基-OH的膨胀振动吸收峰，-1是CO望远镜振动吸收峰。 吸收峰； 2955、2869、1446和-1是分子中碳氢化合物基团产生的吸收峰。 计算机检索后，组件X的红外光谱中豆醇的匹配速率为96.6。 与组件X和组件I的红外光谱相比，组件X也可能是（）和菠菜固醇（）的混合物。

3.3.6化合物的结构分析结

这些化合物是白色粉末固体，不溶于有机溶剂，略溶于冷水，可溶于稀释的氨水，可以溶解热水。

在化合物的红外光谱中（图3-52），-1是Nzhou的膨胀和振动吸收峰。 -1是C = O的伸缩振动吸收峰; ; -1是分子C = C双键中的膨胀振动吸收峰。 -1是通过NH弯曲振动产生的吸收峰。 从上面可以知道，化合物有包含-nh，c = o和c = c组。 在计算机搜索之后，化合物的红外光谱与尿液中的尿液（见图3-35）的红外光谱（见图3-35）相同（见图3-35）。

可以推断化合物是尿嘧啶（，8），其结构如图3-51所示。

第四章 结论

在本文中，对非洲采用的药用扁桃体成分进行了初步研究，包括无机元素，挥发性成分和有机成分。 在对有机成分的研究中，用水和85％的乙醇提取植物，有机成分分为两部分：水 - 溶剂和脂肪 - 溶剂。 在脂肪的这一部分中，它集中在低极性部位（石油醚的提取）和高极性（矫形酚提取）上。

在挥发性成分的研究中，采用了HS-SPME方法，并与GC-MS [48-51]合并以提取和分离扁桃体中的挥发性成分。 相对满足。 最后，将59种化合物与扁桃体龟的挥发性成分分离，包括许多物质，例如烯烃，烷烃，酒精，酮和酯。 其中，烯烃含量最多，含量为60.81％。 其次是酒精（20.05％），饱和烷烃（9.76％），酮（5.27％）和酯（3.40％）。 含量最高的前五个组件是：4（14），11-欧研究生叶（20.90％），石竹型（18.53％）（18.53％），苯酚（15.07％），1（10），11-质量阈值（11-质量阈值）（ 7.78％）和p紫色酮（3.70％）。 在这50种化合物中，单个和半符号化合物是八个和14种，但两者的含量是扁桃体中挥发性成分的77％，这是主要成分。 其中，单个大小化合物的含量约为20％，约为57％。 单个伴侣和半乳糖 - 符合化合物是植物挥发油的主要成分。 他们有多种生理活动。 例如，石竹型具有哮喘作用，可用于治疗支气管炎。 A. them骨具有明显的抗呼吸和祈祷作用，并具有抗真菌作用[52]。 扁桃龟中的无机元素用于消除微波炉。 直接诱导的等离子体原子发射频谱组合技术[53-57]，该技术对14种无机元素进行了定性和定量测试，包括Na，Mg，CA，A1，A1，A1，B，Cu，Cu，Cu，Ba，ba，Zn，Zn，Sr，Sr，Sr，Mo，Mo，Ni，Ni，Ni，Ni，，Ni，，Ni，，Ni，，Ni，Ni，，Ni，，，，地位NI，MN和FE。 结果表明，该样品包含13种除NA元素以外的无机元素，包括必要的常数元素（CA和MG），必要的微量元素（Cu，Zn，Mo，Mo，Mn和Fe）以及其他元素（A1 ，A1，A1，A1，B，BA，SR，V和NI）。 其中，CA，NG，AI，FE和MN的含量都高100ug.g-1，而CA和MG的含量高达9159 + 137UG.G-1和3957 + 33EUG。 g-1。 Zn，B，Sr和Cu也富含内容，所有内容均高于10ug.gg-1。 BA，V，MO和NI的内容较低，而NI只能进行定性测试。

在对有机成分的研究中，列层分析和膜分离技术总共分离八种化合物，并使用包括IR，UV，MS，MS，NMR和X射线在内的多种测试方法来识别其结构。 还确定了这些化合物的几种物理特性（包括溶解度，熔点和不同溶剂中的荣耀）。

其中，在脂肪溶剂部分的低极性部分中，一个脂肪酸（己烷，1）和两个固醇（，2和菠菜酒精，3）分开。 同时，研究结果还表明，在这一部分中，仍然存在低水平的脂肪酒精化合物。 在脂肪溶剂部分的高极性部分中，鉴定出三种化合物，即diic Acid（4），（5）和（6）。 该化合物是从2009年的分离中获得的[42]。 但是，在报告中，仅具有极有限化合物的光谱数据（仅1H -NMR）。 在本文中，晶体是从扁桃体龟鸽子中提取的。 通过研究抗癌植物扁桃体隧道龟的化学组成，获得了一系列频谱检测方法，尤其是其六个最重要的NMR数据，包括1H -NMR，13C -NMR，DEPT，DEPT，DEPT，DEPT，DEPT，DEPT，GCOSY，GCOSY，GHSQC，GHSQC，GHSQC和GHMBC。 同时，X射线技术还用于分析晶体结构并确认准确的结构。 在文章中，使用理论知识，您学会了解释并解释其空间结构中的一些问题。 在分析 NMR数据的数据中，在先前的文档[46] [47]中发现了一些不正确的烃匹配问题。 通过应用理论知识，本文中的分析和结论是可信的。 同时，研究还发现，该部分还包含大量多糖。

在扁桃体乌龟鸽子水溶性成分的分离中，采用了膜分离技术。 提取溶液通过陶瓷膜和有机膜后，根据分子分子量的不同测量，将其分为四个片段，分子量的分子量超过100,000个分子量，100,000 10,000 10,000、1,000和1,000。 植物的活性部位或有效成分的分子量通常很小，只有几百万美元，因此分子量的水溶液低于1,000。 最后，脂肪酸（，7），两个固醇（豆醇和菠菜酒精）和嘧啶（尿液，8）。 其中，尿吡啶是第一次与植物分离的生物碱化合物，它是抗癌活性物质5.氟氧化试验性化合物。