作者
梁轩、张荣芳、谢志平、高寒春期、招兵买马、刘东海
细支气管炎（简称细支气管炎）是婴幼儿常见的下呼吸道感染疾病。最常见的原因是病毒感染，其中呼吸道合胞病毒(RSV)是最常见的病原体[1]。人博卡病毒(HBoV)作为儿童呼吸道感染的重要病原体，因其与呼吸道感染的相关性而受到关注[2,3]。本研究采用巢式聚合酶链式反应（-，-PCR）和逆转录聚合酶链式反应（-链，RT-PCR）对HBoV、RSV等常见呼吸道病毒进行检测，了解HBoV在人群中的感染状况。并比较单一HBoV感染与单一RSV感染儿童的临床特征。
1. 材料与方法
1.1 一般信息
选取2015年1月至2016年12月甘肃省妇幼保健院儿童哮喘中心收治的毛细支气管炎患儿396例。诊断均符合《主妇堂实用儿科》毛细支气管炎的诊断标准[4]。从发病到纳入研究时间在3 d以内，其中男性215例，女性181例，平均年龄（8.35±1.71）个月。排除标准：近1个月内有呼吸道感染史者；患有先天性心脏病、先天性喉软骨发育不良、肺部畸形、中枢神经系统疾病等疾病者；有哮喘家族史且最近接受免疫抑制剂治疗的人；中途放弃治疗或临床资料不完整者。本研究经甘肃省妇幼保健院伦理委员会批准，所有入选患儿家长均签署治疗知情同意书。
1.2 标本采集
采用无菌负压法抽取患儿入院24小时内鼻咽抽吸物2～4ml，分成两份，在采样管上标注患者信息，一份加入病毒保存液冷冻保存它。尽快保存并运至中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，进行HBoV、RSV等6种常见呼吸道病毒的核酸检测。我院对另一标本进行了细菌和真菌培养，同时采集了相应的患者样本。取儿童静脉血2ml，采用酶联免疫吸附法检测肺炎支原体和肺炎衣原体特异性抗体。详细记录HBoV、RSV感染阳性儿童的相关临床资料。
1.3 病毒检测
采用PCR和RT-PCR方法检测HBoV、RSV、腺病毒(ADV)、甲型、乙型流感病毒(B、Flu AB)、副流感病毒1、2、3型(I～III、PIVⅠ～Ⅲ)。使用病毒核酸微量提取试剂盒（公司）按照试剂盒说明书进行核酸提取。采用巢式PCR方法扩增HBoV NS1片段。第一轮引物F0：5′--3′，R0：5′-ATC-3′，扩增片段长度为732bp；第二轮引物F1：5′--3′，R1：5′--3′，扩增片段长度为518bp。反应条件为：95℃，预变性5min，98℃10s，52℃10s，72℃1min，扩增40个循环，72℃最终延伸7次。分钟。第二轮扩增产物全部经1.5%琼脂糖凝胶电泳纯化回收后，阳性产物送北京天一汇源公司测序。其他6种常见呼吸道病毒检测所需的引物序列可参见参考文献[5]。
1.4 统计方法
.0软件用于统计。测量数据以(±s)表示。组间比较采用两个独立样本t检验。计数资料用比率描述。采用卡方检验进行组间比较。磷
2. 结果
2.1 呼吸道病毒检出率
396份标本中病毒阳性212份，阳性检出率为53.54%，其中RSV 9.84%（9.84%）、RSV 97份（24.49%）、PIV 34份（8.59%）、ADV 21份（5.30%）、 31 流感。示例（7.83%）。排除常见细菌、真菌、MP、CP感染，HBoV单一感染29例，与其他病毒混合感染10例（25.64%）。混合感染病毒为RSV 5例，PIV 3例，ADV 2例；单一RSV感染86例。与其他病毒混合感染11例（11.34%），混合病毒为HBoV 5例，PIV 4例，ADV 1例，Flu 1例； HBoV较RSV更易与其他呼吸道病毒混合感染（χ2=4.357，P=0.037），RSV混合感染更为常见。
2.2 流行病学特征
39例HBoV感染儿童中，男性27例，检出率为12.56%（27/215）；女性12例，检出率为6.63%（12/181）。男性高于女性，差异有统计学意义（χ2＝3.890，P=0.049）。 97例RSV感染儿童中，男性56例，检出率为26.05%（56/215）；女性41例，检出率为22.65%（41/181）。差异无统计学意义(χ2=0.612, P=0. 0868)。
39例HBoV感染患儿平均年龄为（8.06±2.47）月。 6～12月龄儿童阳性检出率最高，占71.79%（28/39）。各年龄段HBoV阳性检出率差异有统计学意义。显着性（χ2=7.82，P=0.049）。 97例RSV感染儿童平均年龄为（6.95±2.77）月龄，其中6～12月龄儿童阳性检出率最高，占54.64%（53/97）。各年龄组RSV阳性检出率差异无统计学意义（χ2=1.502，P=0.682）。
HBoV全年均有检测，无明显季节性分布。高峰检出高峰为2015年11月7例（17.4%）。RSV检出集中在冬春季节，高峰集中在2015年11月至2016年3月。6月至8月为疫情低谷期，检出高峰高峰为2016年2月19例（65.2%）。
2.3 单一HBoV感染与单一RSV感染合并毛细支气管炎患儿临床资料比较
HBoV组更容易出现呕吐和腹泻（P[6]评估了HBoV单一感染组和RSV单一感染组毛细支气管炎的严重程度，结果显示HBoV中中重度儿童的比例两组实验室检查指标均低于RSV组（6.9% vs. 10.5%；P=0.012），差异无统计学意义（P>0.05）。常见于HBoV单一感染组（P=0.046），见表1。
表1 单一HBoV和单一RSV感染儿童的临床特征和病情严重程度比较。
HBoV 和 RSV 的表 1
三、讨论
自2005年首次从瑞典下呼吸道感染儿童鼻咽分泌物中分离出HBoV以来[2]，HBoV的存在在世界范围内陆续得到证实，并被确定为呼吸道感染的重要病原体。儿童中，检出率高于儿童急性呼吸道感染。呼吸道感染中约2.7%至26.2%为呼吸道感染，是婴幼儿喘息的最常见原因之一。 HBoV的致病机制尚未完全阐明。本研究对常见呼吸道病毒的检测中，RSV检出率最高（24.49%），其次是HBoV（9.84%），与国内外研究相似[7,8]，表明HBoV在患有细支气管炎的儿童的呼吸道分泌物。检出率较高，提示HBoV可能是除RSV之外另一种引起毛细支气管炎的重要病毒。
本研究发现HBoV感染病例存在性别差异，男性高于女性（P[9]）；日本研究结果表明，72%的感染主要发生在春季[10]；我国北京[11]报告HBoV检测人数高峰主要集中在8月至11月；广州报道[12]，检测高峰期为5月至6月。本研究表明，HBoV全年均有检测，无明显季节性分布； RSV与HBoV的不同之处在于检测高峰集中在冬春季节。与国内外报道的疫情季节基本一致。两个流行季节的不同结果可能与地理差异、气候特征、标本采集量和检测方法、病毒亚型等有关。
HBoV 阳性呼吸道标本中经常同时检测到其他呼吸道病毒 [13]。本研究中HBoV和RSV的混合感染率分别为25.64%和11.34%，表明两者均易混合感染，且HBoV比RSV更易感。混合其他呼吸道病毒感染（P
本研究发现，单一HBoV和单一RSV感染儿童的主要临床表现相似。比较发现，HBoV感染儿童出现呼吸急促、呼吸困难和低氧血症（SPO2[14]提出HBoV可能只是伴生者。也发现病毒而非消化道疾病的致病病原体在儿童中更为常见） HBoV 组的毛细支气管炎患儿高于 RSV 组（P
综上所述，HBoV可能是引起婴幼儿毛细支气管炎的病毒病原体之一。 HBoV和RSV感染引起的毛细支气管炎儿童具有相似的临床特征、实验室和影像学改变。感染HBoV的儿童病情可能更严重。 RSV 很轻。阐明HBoV引起毛细支气管炎的病因机制对于指导临床相关防治策略具有重要意义，值得进一步深入研究。
摘自《中国实验与临床病毒学杂志》，2018，32（2）