凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量

凯氏定氮法测定黄豆的粗蛋白含量

概括：

凯氏定氮法测定大豆中粗蛋白含量

1. 原理

将食品样品加热，在硫酸和催化剂的作用下消化，使蛋白质分解，其中C和H形成CO2和H2O逸出，而氮则以氨的形式与硫酸反应生成硫酸铵并残留在酸液中。消化液再经碱化、蒸馏，使氨游离，氨随水蒸气蒸发，被硼酸吸收。生成的硼酸铵用标准盐酸溶液滴定，由消耗的盐酸标准溶液计算出总氮含量，再换算成粗蛋白含量。

2NH2-(CH2)2-COOH + →(NH4)2 SO4 + 6CO2+ 12SO2 + 16H2O

(NH4)2SO4 + 2NaOH→2NH3++ 2H2O

2NH3 +→(NH4)2B4O7 + 5H2O

(NH4)2B4O7 + 2HCl + 5H2O → +

2. 仪器和试剂

1. 100mL 凯氏烧瓶

2.微量凯氏定氮仪

3. 试剂

硫酸铜 硫酸钾 硫酸 2%硼酸溶液

混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液与0.1%甲基蓝乙醇溶液，按2：1比例混合后使用。或0.1%甲基红乙醇溶液与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液，按1：5比例混合后使用。

20%NaOH溶液 0.01mol/L HCl标准溶液

3. 测定方法

1. 样品消解：

准确称取约0.3g均匀粉碎的黄豆粉，小心转入干燥的凯氏烧瓶中（不要让其粘附在瓶壁上），加入0.10mL浓硫酸，在烧瓶口插入合适口径的干燥管，用带软管的液压真空管连接，利用液压动力抽出消解过程中产生的烟雾。先用小火慢慢加热，待内容物完全炭化、泡沫消失后再加大热度，消解至溶液透明呈蓝绿色为止。撤去排气管，继续加热0.5h，冷却至室温。

取20mL蒸馏水，缓慢加入容量瓶中，待样品冷却至室温后，转移至100mL容量瓶中，用蒸馏水冲洗容量瓶数次，加入容量瓶中，旋涡混匀，放冷，再用蒸馏水定容备用。

同时进行空白消化。

2、蒸馏和吸收：

1> 按照蒸馏装置图安装好装置，打开所有夹子。拔掉进样口处的接地插头，从进样口处加入50mL蒸馏水，再插上电源插头。将冷凝管与冷凝器连接好。

2>在蒸汽发生瓶中加入蒸馏水至其容积的三分之二，加入几粒沸石和4滴甲基橙，再加入3mL浓硫酸，然后放在电炉上加热使水沸腾。

3> 产生蒸汽后，夹紧夹钳1，使蒸汽通过导管进入反应管外套管内。蒸汽从废液排液口排出后，夹紧夹钳3，使蒸汽进入反应管内蒸馏洗涤10分钟。打开夹钳1，同时夹紧夹钳2。反应管内水全部排入外套管内后，打开夹钳3，排出废水。立即从加液口加入约20mL蒸馏水，立即再次夹紧夹钳3，等待水排出。重复操作3次，洗涤完毕。

4>打开所有夹钳，从进样口吸取10mL试样溶液（或空白溶液）加入到反应管中，塞上磨口塞。量取2%硼酸25mL置于250mL锥形瓶中，再将吸收液置于冷凝管下端，冷凝管下端应插入液面以下。再从进样口加入约%NaOH溶液，使反应管中试样溶液有黑色沉淀或变为深蓝色，用少量水冲洗进样口，塞上磨口塞，用少量水封好。

5>夹紧夹钳1，使蒸汽经导管进入反应管外套管内。待蒸汽从废液排出口排出后，夹紧夹钳3，使蒸汽进入反应管内。开始蒸馏。待吸收液变蓝后，计时蒸馏10分钟，提起冷凝管下端离开吸收液面，再蒸馏1分钟。用萘氏试剂检查无氨后，停止接收馏出液。打开夹钳1，同时夹紧夹钳2。待反应管内样品废液全部排入外套管内后，打开夹钳3，排出废液。立即从进样口加入约20mL蒸馏水，立即再次夹紧夹钳3，待水排出后，重复操作洗涤3次，然后进行样品的平行测定。测定完毕，打开所有夹钳，停止加热，待冷却后，取出装置洗涤。

3.滴定：

用0.01 mol/L HCl滴定吸收液，至呈红色为终点，记录所消耗的HCl体积。

4.计算：

蛋白质 % =

C—HCl标准溶液浓度mol/L

V1 — 滴定样品吸收溶液所消耗的 HCl 标准溶液的体积 mL

V2——滴定样品空白溶液所消耗的HCl标准溶液的体积，mL

m — 大豆粉质量 g

F — 大豆蛋白质含量换算系数 5.71